Ein Verfahren zur Probenvorbereitung zur Visualisierung von Biofilm-bildenden Bakterien auf Pilzhyphen

Führen Sie eine zellophangebundene Pilzkolonie in eine fluoreszenzmarkierte Bakteriensuspension ein. Entfernen Sie das Zellophan und inkubieren Sie.

Die Bakterienzellen heften sich über Oberflächenmoleküle und Rezeptoren an die Pilzoberfläche. Die anhaftenden Bakterien sezernieren extrazelluläre polymere Substanzen, die aus Polysacchariden, Proteinen und DNA bestehen, die Bakterienzellen einfangen und die strukturelle Grundlage des Biofilms bilden.

Spülen Sie den Abschnitt in einer starken Salzlösung ab, um lose gebundene Bakterien zu entfernen

Schneiden Sie in einem Phosphatpuffer einen Teil des Volkes ab.

Übertragen Sie den Schnitt in steriles Wasser, das Weizenkeimagglutinin oder WGA enthält, das an einen roten Fluoreszenzfarbstoff gebunden ist.

WGA, ein pflanzliches Protein, bindet an N-Acetylglucosamin- und Sialinsäurereste, wodurch der angehängte Farbstoff an der Zellwand des Pilzes fluoreszieren kann.

Spülen Sie den Abschnitt mit einem Phosphatpuffer ab.

Tauchen Sie eine Folie teilweise in den Puffer ein. Lassen Sie den Abschnitt darauf schweben. Heben Sie den Abschnitt vorsichtig an, damit er sich absetzt, ohne dass der Biofilm gestört wird.

Legen Sie ein Eindeckmedium an,