Echtzeit-Analyse der residenten T-Zell-Migration in verschiedenen Tumorregionen mittels konfokaler Mikroskopie

Beginnen Sie mit einem Lungentumorschnitt, der residente T-Zellen enthält.

T-Zellen wandern durch die Mikroumgebung des Tumors und interagieren mit Tumorzellen und Stromaelementen, die Immunfunktionen erfüllen.

Die Zusammensetzung der Tumormikroumgebung hat einen starken Einfluss auf die Verschiebung und Geschwindigkeit der T-Zellen.

Fügen Sie unterschiedliche fluoreszenzgekoppelte Antikörper hinzu, um T-Zellen, Tumorzellen und stromale Elemente in der Mikroumgebung zu markieren.

Fügen Sie DAPI hinzu, das Zellen mit einer beschädigten Plasmamembran infiltriert, um den Zellkern zu färben und so die Visualisierung nekrotischer Regionen innerhalb des Tumors zu ermöglichen.

Beobachten Sie die gefärbte Probe unter einem konfokalen Mikroskop.

Wählen Sie mit einem geeigneten Fluoreszenzlicht eine Tumorregion von Interesse aus, die residente T-Zellen enthält. Bewerten Sie die Lebensfähigkeit von Zellen durch die Bewertung von DAPI-positiven Zellen.

Definieren Sie für die Echtzeitanalyse Zeitintervalle und die Gesamtaufzeichnungszeit.

Um Z-Stapel-Bilder zu erfassen, beginnen Sie mit einer Tiefe unterhalb der beschrifteten T-Zellen und erfassen Sie Bilder in verschiedenen Zeitintervallen.

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