Ein zellbasierter Assay zur Beurteilung der Aufnahme des Tau-Proteins durch Mikroglia

Beginnen Sie mit einer Multi-Well-Platte mit flachem Boden, die anhaftende murine Mikroglia – phagozytische Zellen im Gehirn

– enthält.

Führen Sie ein serumfreies Medium ein, das Immunkomplexe enthält. Diese Komplexe bestehen aus Antikörpern, die an phosphorylierte Tau-Protein-Aggregate gebunden sind, die bei bestimmten neurodegenerativen Erkrankungen gebildet werden.

Die Tau-Aggregate sind mit einem pH-empfindlichen grünen Fluoreszenzfarbstoff markiert.

Während der Inkubation interagieren diese Immunkomplexe mit den Fc-Rezeptoren der Mikrogliazellen und erleichtern deren Verschlingung.

Dieses Immunkomplex-haltige Endosom verschmilzt mit einem Lysosom und bildet ein Endolysosom. Das saure Milieu des Endolysosoms lässt die Farbstoffmoleküle fluoreszieren.

Waschen, um die nicht internalisierten Immunkomplexe zu entfernen.

Mit Trypsin-EDTA-Lösung behandeln, um die Zellen abzulösen.

Übertragen Sie die Zellsuspension auf eine U-Bodenplatte, die über Eis positioniert ist, um das Endolysosom zu stabilisieren. Pelletieren Sie die Zellen und entsorgen Sie den Überstand.

Waschen Sie die Zellen und resuspendieren Sie sie mit FACS-Puffer.

Identifizieren Sie mit FACS die einzelnen lebenden Zell