Ein Assay zur Messung des neutralisierenden Antikörpertiters, der spezifisch für das Respiratorische Synzytialvirus ist

Nehmen Sie seriell verdünntes, hitzeinaktiviertes Humanserum ein, das das Respiratorische Synzytial-Virus oder RSV-spezifische neutralisierende Antikörper enthält.

Fügen Sie die Virussuspension hinzu. Die Antikörper neutralisieren die Viren verdünnungsabhängig.

Die Mischung wird in humane Epithelzell-Monoschichten eingebracht und zur Virusadsorption inkubiert.

Entsorge die Mischung. Carboxymethylcellulose-haltige Medien werden zugegeben, so dass eine halbfeste Überlagerung entsteht. Ausbrüten.

RSV nutzt die Maschinerie der Wirtszelle, um virale RNA und Proteine zu synthetisieren, die sich anschließend zusammensetzen und als einzelne Virionen knospen.

Infizierte Zellen sterben schließlich ab. Carboxymethylcellulose schränkt die Virusbewegung ein, was zu einer lokalen Infektion und zum Zelltod führt und Plaques bildet.

Entfernen Sie das Overlay.

Fixieren Sie die Zellen mit einem acetonhaltigen Puffer. Führen Sie einen detergenzienhaltigen Blockierungspuffer ein, um die Zellen zu permeabilisieren und unspezifische Antikörperwechselwirkungen zu verhindern.

Fügen Sie primäre Antikörper hinzu, die auf virale Proteine abzielen.

Overlay mit Fluorophor-konjugierten Sekundärantikörpern, die