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Lassen Sie eine Maus im Käfig Trinkwasser trinken, das mit einem synthetischen sulfatierten Polysaccharid gemischt ist, von dem bekannt ist, dass es Colitis, eine entzündliche Darmerkrankung, auslöst.
Dieses Polysaccharid dringt in das Darmlumen ein und stört die Epithelbarriere, so dass kommensale Mikroben in das Gewebe eindringen können, was zu Entzündungen führt.
Monozyten infiltrieren das Gewebe und differenzieren sich zu Makrophagen.
Injizieren Sie intravenös Fluorophor-konjugierte Antikörper in den Schwanz der Maus.
Die Antikörper gelangen in den Dickdarm und binden an das Zielglykoprotein auf Makrophagen, wodurch die Zellen markiert werden.
Betäuben Sie die Maus. Rasieren Sie das Bauchfell, um Lichtreflexion und -absorption während der Bildgebung zu minimieren.
Legen Sie die Maus in eine Untersuchungskassette und setzen Sie sie in einen Fluoreszenz-vermittelten Tomographie- oder FMT-Scanner ein.
Bei Anregung emittiert das Fluorophor eine Fluoreszenz. Nehmen Sie die Fluoreszenzreflexionsbilder auf, um eine dreidimensionale Karte zu rekonstruieren, die die räumliche Verteilung der Fluorophore zeigt.
Eine erhöhte Fluoreszenzintensität deutet auf eine erhöhte Makrophageninfiltration hin.
Um eine Kolitis auszulösen, füllen Sie den Trinkvorrat der Versuchsmäuse mit 2 Gramm Dextran-Natriumsulfat oder DSS, gelöst in 100 Millilitern autoklaviertem Trinkwasser, schätzungsweise 5 Milliliter Wasser pro Maus und Tag. 24 Stunden vor dem Scannen füllen Sie den Antikörper-Cocktail von Interesse in eine sterile, lichtgeschützte Spritze und injizieren Sie die Antikörper intravenös in die Schwanzvenen der Versuchstiere.
Rasieren Sie am Tag des Versuchs mit einem Elektrorasierer das Fell in der Bauchregion der Versuchstiere, um die Lichtreflexion und -absorption zu minimieren. Füllen Sie das Phantom unter Verwendung eines gewebeähnlichen Phantoms mit definierter Dicke und Absorptionseigenschaften mit einem bestimmten Volumen der interessierenden Antikörperlösung und messen Sie die Fluoreszenz auf dem FMT-Gerät.
Klicken Sie dann auf einer veterinärmedizinischen Fluoreszenztomographie oder einem FMT-Gerät für Kleintiere auf Neue Studie und fügen Sie die relevanten Tracer in die Studienbeschreibung ein, einschließlich der Bildgebungsparameter und Dosen. Erstellen Sie Studiengruppen entsprechend dem experimentellen Studiendesign und statten Sie jede Gruppe mit der entsprechenden Anzahl von Tieren aus.
Wenn das System für die Tracer-Konstrukte kalibriert wurde, legen Sie die erste anästhesierte Maus in Rückenlage in eine bei 42 Grad Celsius beheizbare Untersuchungskassette. Setzen Sie die Kassette in das Bildgebungssystem ein und wählen Sie die entsprechende Probe aus der entsprechenden Studiengruppe aus. Wählen Sie den verabreichten Tracer aus, um sicherzustellen, dass die Werte der Tracerkonzentration korrekt berechnet werden, und erfassen Sie das Fluoreszenzreflexionsbild bei der für den Scan geeigneten Wellenlänge.
Klicken Sie auf Bild erfassen, um das Scanfeld zu umranden, und bestätigen Sie, dass das Scanfeld als Überlagerung auf dem Fluoreszenzreflexionsbild angezeigt wird. Passen Sie das Scanfeld so an, dass es den interessierenden Bereich umgibt, und achten Sie darauf, Luft oder Fellreste zu vermeiden.
Wählen Sie je nach Bildziel eine Scanfeldauflösung aus, um die Anzahl der Bilddatenpunkte innerhalb des Scanfelds festzulegen. Klicken Sie dann auf Scannen, um die Bildaufnahme bei der ausgewählten Wellenlänge zu starten. Nehmen Sie das Tier am Ende des Scans aus der Kassette, damit sich das Tier unter Überwachung vollständig erholen kann, bevor es in seinen Käfig zurückkehrt. Die FMT kann dann zu verschiedenen Zeitpunkten wiederholt werden, je nachdem, was experimentell sinnvoll ist.