Ein mikrofluidisches kartuschenbasiertes Detektionssystem für allergenspezifisches Immunglobulin E

0 Ansichten3:31 Min. • July 8th, 2025

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Beginnen Sie mit einer mikrofluidischen Kartusche, die mit Vorratstanks und unidirektionalen Pumpen ausgestattet ist, die Reagenzien durch Kanäle in eine Reaktionszone fördern.

Die Reaktionszone enthält mehrere Flecken, die mit unterschiedlichen Allergenen immobilisiert sind.

Laden Sie den Waschpuffer, den Blockpuffer, Peroxidase-konjugierte Sekundärantikörper und ein chemilumineszierendes Peroxidasesubstrat in die dafür vorgesehenen Tanks.

Fügen Sie eine Serumprobe hinzu, die allergenspezifisches Immunglobulin E oder IgE enthält.

Starten Sie die Analyse in einem Chemilumineszenz-Analysator.

Innerhalb der Reaktionszone fließt der Blockpuffer und blockiert unspezifische Interaktionsstellen.

Die Einführung von Serum ermöglicht es den IgE, mit den immobilisierten Allergenen zu interagieren.

Durch das Waschen werden ungebundene IgE eliminiert.

Als nächstes strömen Peroxidase-konjugierte Sekundärantikörper ein und interagieren mit den immobilisierten IgEs.

Durch das anschließende Waschen werden ungebundene Antikörper entfernt.

Der Analysator führt dann das chemilumineszierende Substrat und Wasserstoffperoxid ein.

Die Peroxidase oxidiert das Substrat und emittiert Lumineszenz .

Die Lumineszenzintensität an jedem Spot liefert einen quantifizierbaren Hinweis auf unterschiedliche allergenspezifische IgEs im Serum.

Um Serumproben auf Immunglobulin-E-Antikörper im Serum gegen ganze Allergene zu testen, wählen Sie nach dem Zufallsprinzip drei Proben mit mindestens 900 Mikrolitern Serum aus, nehmen Sie den Chip aus dem Kit und nummerieren Sie ihn. Schalten Sie dann den Computer und die Stromversorgung des Analysators ein. Starten Sie das LabIT-Programm auf dem Computer.

Wenn das Warnfenster für dunkle Frames angezeigt wird, klicken Sie auf OK, um einen Dichtheitstest durchzuführen. Klicken Sie dann auf das mittlere Logo, um die Bedienoberfläche aufzurufen. Überprüfen Sie die Reaktionstemperatur und die Temperatur des ladungsgekoppelten Geräts oder des CCD. Die Reaktionstemperatur sollte in etwa 10 Minuten auf 37 plus oder minus 1 Grad Celsius ansteigen, und die CCD-Temperatur sollte auf minus 15 plus oder minus 1 Grad Celsius fallen.

Wenn die CCD-Temperatur auf minus 15 plus oder minus 1 Grad Celsius gesunken ist, vergewissern Sie sich, dass sich keine anderen Gegenstände mehr im Gerät befinden, und schließen Sie die Tür. Klicken Sie dann auf Extras, Systemtest, Dichtheitstest. Wenn der Test abgeschlossen ist, wird das Berichtsfenster angezeigt.

Als nächstes laden Sie 620 Mikroliter Waschpuffer, 120 Mikroliter Blockierungspuffer, 60 Mikroliter Konjugate A und B, 60 Mikroliter der Substrate A und B und 100 Mikroliter jeder Serumprobe in die entsprechenden Reagenztanks auf der mikrofluidischen Kartusche. Nachdem Sie auf Kartuschen-ID geklickt haben, scannen Sie mit dem Barcode-Scanner die Seriennummer der Kartusche und geben Sie die Proben-ID ein. Setzen Sie dann die Kartusche in das Analysegerät ein, schließen Sie die Klappe, klicken Sie auf Analysegerät und führen Sie es aus, um die Analyse zu starten.

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Zuletzt aktualisiert: 1 August 2026