Bewertung der intrazellulären Verteilung von Virus-abgeleiteten peptidmodifizierten Antikörperkonjugaten
JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Immunologie
0 Aufrufe • 4:59 Min. • July 8th, 2025
Beginnen Sie mit anhaftenden menschlichen Erythroblastenzellen.
Einführung von Virus-abgeleiteten, peptidmodifizierten Antikörper-Konjugaten. Diese Konjugate enthalten eine nukleare Lokalisationssequenz (NLS) aus dem Virus und einen Cholsäurerest.
Während der Inkubation interagieren die Antikörperkonjugate mit Zelloberflächenrezeptoren und internalisieren in Endosomen.
Die Cholsäure im Konjugat hilft, aus dem endosomalen Kompartiment zu entkommen und ermöglicht so eine intrazelluläre Akkumulation, während die Transportproteine und NLS ihre Kernlokalisierung erleichtern.
Führen Sie Trypsin und EDTA-haltigen Puffer ein, um die Zellen abzulösen und oberflächengebundene Konjugate zu entfernen.
Fügen Sie mit Serum angereicherte Medien hinzu, um die Trypsinaktivität zu hemmen.
Zentrifuge, um die Zellen zu sammeln, sie zu fixieren und zu permeabilisieren.
Führen Sie dunkelrote, fluorophormarkierte Sekundärantikörper ein, die an lokalisierte Konjugate binden und waschen.
Mit einem nuklearen Färbefarbstoff behandeln.
Beobachten Sie unter einem konfokalen Mikroskop und nehmen Sie Bilder in verschiedenen planaren Tiefen auf.
Nach der Bildverarbeitung zeigt die Zelle kleine grün fluoreszierend
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