Die Verschont Nerve Injury (SNI) Modell induzierte mechanische Allodynie in Mäusen

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, ein Mausmodell für neuropathische Schmerzen nach peripheren Nervenschäden zu etablieren. Dies wird erreicht, indem zuerst die Maus betäubt, das Hinterbein in die entsprechende Position gebracht und der Ischiasnerv freigelegt wird. Als nächstes wird eine definierte Nervenverletzung eingeführt, indem zwei Äste des Ischiasnervs vernäht werden, wobei der dritte Ast intakt bleibt.

In diesem Video werden der Nervus tibialis und der Nervus perineus communis vernäht und durchtrennt, während der Nervus sorel geschont wird. Nach einer Nervenverletzung können jedoch auch andere Kombinationen angewendet werden. Die Misa wurde in einem Zylinderbehälter auf einem Drahtgittertisch platziert und an die Misa gewöhnt, dann wurde sie mit dem Von-Fray-Assay getestet, der eine quantitative Messung der induzierten mechanischen Allodynie ermöglicht.

Die kalibrierten Von Fray Filamente werden in aufsteigender Reihenfolge auf den lateralen Bereich der betätigten Pore aufgebracht. Um die mechanische Schwelle zwischen operierten und nicht bewerteten Hintergliedmaßen zu erkennen, wird eine schmerzhafte Reaktion entweder als schneller Porenrückzug, Zucken und/oder Porenlecken bei Filamentstimulation definiert. Letztendlich kann die Entwicklung der mechanischen Allodynie im operierten Bein im Vergleich zur unbewerteten Seite durch die Darstellung der mechanischen Schwelle über die Zeit visualisiert werden, was die Untersuchung verschiedener molekularer Signalwege oder medikamentöser Behandlungen nach einer peripheren Nervenverletzung ermöglicht.

Diese Methode kann helfen, Schlüsselfragen auf dem Gebiet der peripheren Nervenschädigung zu beantworten, wie z. B. molekulare Signalwege, die an der Entwicklung neuropathischer Schmerzen beteiligt sind. Darüber hinaus können auch Medikamente getestet werden, die darauf abzielen, die Schmerzentwicklung zu beeinträchtigen oder die Schmerzsymptome zu lindern. Zwei Tage vor der Operation wurden die Mäuse in rot gefärbte Kunststoffzylinder gelegt, die auf einem Drahtgittertisch in einem ruhigen Raum positioniert waren, die Mäuse 15 Minuten lang in den Zylindern gewöhnt, bevor sie nach 15 Minuten getestet wurden, überprüfte, ob die Mäuse ruhig waren, und trug dann die Filamente in aufsteigender Reihenfolge auf. Beginnend mit dem 0,02 Gramm Filament. Üben Sie zunächst fünfmal über einen Zeitraum von insgesamt 30 Sekunden Kraft auf den lateralen Bereich der linken Pore aus und messen Sie nach jeder Anwendung die Reaktion der Maus, wiederholen Sie dies mit demselben Filament und der linken Pore der anderen Maus und beginnen Sie dann wieder mit der rechten Pore, bevor Sie zum nächsten Filament übergehen.

Eine positive Schmerzreaktion ist definiert als plötzlicher Porenrückzug, Zehenspreizung und/oder übermäßiges Porenlecken, das durch das Filament induziert wird, und positive Reaktion bei drei von fünf sich wiederholenden Reizen ist definiert als Schmerzschwelle. Betäuben Sie die Tiere durch intraperitoneale Injektion einer Mischung aus Ketamin und Xylazin und bringen Sie die Tiere bis zur vollständigen Betäubung an einen ruhigen Ort. Überprüfen Sie die Reflexe, indem Sie die Schwanzspitze und die Pause mit einer Pinzette einklemmen und sicherstellen, dass die Tiere nicht reagieren, bevor Sie fortfahren.

Injizieren Sie anschließend 0,5 Milliliter isotonische Kochsalzlösung subkutan mit Antibiotika, um Dehydration zu vermeiden und Infektionen mit einem Elektrorasierer zu verhindern, und rasieren Sie das Operationsfeld von etwas unterhalb des Kniebereichs bis zum Hüftbereich für Rechtshänder. Personen, die mit der linken Hintergliedmaße arbeiten, können am bequemsten sein. Tragen Sie Salbe mit einer Watte-Wandknospe auf die Augen auf.

Legen Sie das Tier auf die rechte Seite und legen Sie das linke Hinterglied auf eine kleine Plattform, um es hochzuhalten und das Bein mit Klebeband zu sichern. Sobald das Tier positioniert ist, desinfizieren Sie das Operationsfeld mit abwechselnden Peelings aus Ethanol und Betadin von der Operationsstelle aus und lassen Sie es trocknen, lokalisieren Sie das Knie mit dem Daumen Ihrer linken Hand und verwenden Sie ein Skalpell, um einen kleinen Schnitt in Längsrichtung proximal des Knies zu machen. Öffnen Sie die Haut durch stumpfes Sezieren mit der Spitze einer Schere.

Legen Sie die Maus anschließend unter ein Stereomikroskop und lokalisieren Sie das deutlich sichtbare Blutgefäß in der Nähe des Oberschenkelknochens. Trennen Sie dann die Muskelschicht durch stumpfe Dissektion. Wenn es richtig gemacht wird, trennen sich die Muskelschichten leicht, ohne dass Blutungen auftreten, die den Ischiasnerv direkt unter den Muskeln freilegen.

Wenn Blutungen aufgrund einer Beschädigung eines nahe gelegenen Blutgefäßes auftreten, verwenden Sie Wattestäbchen oder Gazestücke, um das Blut durch Drücken aufzunehmen, bis die Blutung aufhört. Spreize die getrennten Muskelschichten vorsichtig mit einer Pinzette Nummer zwei. Um den Ischiasnerv sichtbar zu machen, legen Sie bei Bedarf Retraktoren an, identifizieren Sie den Bereich, in dem der Nervus suralis vom Ischiasnerv abzweigt.

Der Nervus suralis ist der kleinste der drei nach rechts abzweigenden Äste im linken Bein. In C 57 legen sechs Mäuse sechs Mäuse eine Sechs-Null-Naht fest um die beiden anderen Äste, die noch parallel verläuft. Achten Sie sehr darauf, den Zweig von Sorel nicht zu berühren.

Fassen Sie die zu schneidenden Nerven unterhalb der Naht mit einer Pinzette Nummer fünf und schneiden Sie dann die Nerven zuerst über und dann unter der Pinzette mit einer kleinen Schere ein, um ein Ziehen der Nerven zu vermeiden. Sind die Nerven durchtrennt, schneiden Sie die Nahtanden mit einer Schere ab und schließen Sie dann sanft die Muskelschicht. Ein Nahtring wird normalerweise nicht benötigt.

Geben Sie einen Tropfen Lidocain auf die Wunde und vernähen Sie sie mit chirurgischen Knoten. Prüfen Sie, ob die Augensalbe noch ausreicht, und legen Sie die Maus dann in einen sauberen Käfig und ein Papiertuch. Stellen Sie in einer bequemen Haltung leicht zugängliches Wasser und Futter bereit.

Wenn der Raum kalt ist. Legen Sie nach einem Tag postoperativer Genesung ein Wärmekissen unter einen Teil des Käfigs, sammeln Sie Von-Fray-Messungen sowohl von operierten als auch von scheinoperierten Mäusen, wie für die Erhebung der Basismessungen beschrieben. Hier werden die Ergebnisse von Von-Fre-Tests an Gruppen von vier bis sechs Mäusen sowohl einen Tag vor der Operation als auch täglich für zwei Wochen nach der Operation gezeigt. Am Tag nach der Operation entwickelten die Tiere eine signifikante mechanische Überempfindlichkeit der operierten oder ipsilateralen Pore, während die nicht operierte oder kontralaterale Pore nicht betroffen blieb.

Die Schwelle auf der kontralateralen Seite ist im Vergleich zu scheinoperierten Mäusen leicht verringert, was darauf hindeutet, dass MI allodynie bei operierten Mäusen in geringerem Maße auftreten kann. Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie man die Äste des S-Nervs bei einer anästhesierten Maus lokalisiert und manipuliert. Der Fray-Assay ermöglicht außerdem eine quantitative funktionelle Auslesung, um die Reaktion von transgenen Tieren oder Arzneimitteln nach einer partiellen peripheren Nervenverletzung zu testen.