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Befestigen Sie eine Spritze mit einem Abgabeschlauch an einer Pumpe. Die Spritze enthält ein Photoinitiator-Polyester-Gemisch, eine einzigartige Polymermischung.
Geben Sie die Mischung in eine viskose wässrige Lösung eines Polymers auf Zellulosebasis. Dies induziert eine Phasentrennung, wodurch eine polymere kugelförmige Struktur entsteht, die als Polyblase bezeichnet wird.
Ultraviolette Strahlung aktiviert den Photoinitiator, wodurch das Polymer vernetzt und eine Hülle gebildet wird, die den inneren Kern umgibt.
Führen Sie als Nächstes eine Nadel ein, um eine viskose Lösung aus Fluorophor-markierten Molekülen in den Polyblasenkern zu injizieren.
Bestrahlen Sie erneut, um die Integrität der Polyblase wiederherzustellen. Gefriertrocknen, um überschüssiges Wasser zu entfernen und die Polyblase zurückzugewinnen.
Um das Freigabeprofil zu überprüfen, inkubieren Sie die Polyblase in einem Puffer.
Bei Kontakt mit einer wässrigen Phase erfährt die Polymerhülle eine Erosion, wodurch sich Poren bilden. Im Laufe der Zeit verbinden sich diese Poren und setzen die markierten Moleküle frei.
Sammeln Sie regelmäßig den Überstand und quantifizieren Sie die Fluoreszenzintensitäten.
Ein plötzlicher Anstieg der Fluoreszenz nach längerer Inkubation bestätigt die verzögerte Burst-Freisetzung.
Um die Polyblasen herzustellen, verwenden Sie zunächst eine 1-Milliliter-Transferpipette, um 800 Mikroliter 10 % CMC in ein 0,92-Milliliter-Glasfläschchen zu geben. Um PCLTA zu synthetisieren, mischen Sie 1.000 Gramm pro Milliliter 14 Kilodalton PCL in 200 Mikroliter DCM. Um PLGADA zu synthetisieren, mischen Sie 1.000 Gramm pro Milliliter 5 Kilodalton PLGADA in 200 Mikroliter Chloroform.
Mischen Sie den Photoinitiator mit der Polymermischung von Interesse in einem Verhältnis von 0,005 zu 1 und laden Sie 200 Mikroliter der resultierenden Lösung in eine 1-Milliliter-Glasspritze, die auf einer Spritzenpumpe montiert ist, die mit einem Dosierrohr aus Edelstahl mit einem Innendurchmesser von 0,016 Zoll verbunden ist.
Unter Verwendung eines Mikromotors zur Steuerung der Vorwärts- und Rückwärtsbewegung des Polymerrohrs injizieren Sie das Polymer in das 10%ige CMC im Glasfläschchen, um die Polyblasen zu bilden und die Polyblasen unter ultraviolettem Licht bei einer Wellenlänge von 254 Nanometern für 60 Sekunden bei 2 Watt pro Quadratzentimeter auszuhärten. Anschließend frieren Sie die Polybläschen 30 Sekunden lang in flüssigem Stickstoff ein und lyophilisieren die Träger über Nacht bei 0,01 Millibar Vakuum und minus 85 Grad Celsius.
Um die Ladung von Interesse innerhalb einer Polyblase zu zentrieren, mischen Sie die Ladung über Nacht mit 5 % CMC und einem Rotator, um die Viskosität der Ladung zu erhöhen, bevor Sie manuell 2 Mikroliter der Ladungsmischung in die Polyblase injizieren. Wenn die gesamte Fracht injiziert wurde, recurieren, schockfrosten und lyophilisieren Sie die injizierte Polyblase, wie gerade gezeigt.
Trennen Sie am nächsten Morgen die Polyblase mit einer Pinzette von der getrockneten CMC und waschen Sie die Polyblase mit deionisiertem Wasser, um alle CMC-Reste zu entfernen. Schneiden Sie dann die Polyblase in zwei Hälften und bilden Sie die Hälften durch konfokale Mikroskopie ab, um sicherzustellen, dass die Ladung zentriert ist.
Für die Freisetzung von kleinmolekularer Fracht inkubieren Sie die Polybläschen mit zentriertem Acriflavin und 400 Mikrolitern PBS bei 37 Grad Celsius für die entsprechende Inkubationsdauer. Sammeln Sie zu jedem Versuchszeitpunkt den Überstand und geben Sie 400 Mikroliter frisches PBS in das Fläschchen. Verwenden Sie dann ein Plattenlesegerät, um die Fluoreszenzintensität des gesammelten Überstands zu quantifizieren.