Eine In-vitro-Methode zur Erzeugung von Organoiden des menschlichen Gehirns

Beginnen Sie mit einer Kultur von Neurosphären, frei schwebenden Clustern von neuroepithelialen Vorläuferzellen.

Übertragen Sie diese Neurosphären auf ein Einbettblatt.

Entfernen von Medien. Geben Sie einen Tropfen extrazelluläre Membranmatrix, die Proteine und Wachstumsfaktoren enthält, zu jeder Neurosphäre.

Inkubieren Sie, damit sich die Matrix verfestigt und die Neurosphären darin einbettet.

Übertragen Sie nun die in die Matrix eingebetteten Neurosphären mit Neurosphärenmedien auf eine Kulturplatte, die Neurosphärenmedien enthält.

ausbrüten. Die extrazelluläre Membranmatrix und ihre Bestandteile erleichtern die Differenzierung der neuroepithelialen Vorläuferzellen in neuroepitheliale Zellen, die sich vermehren und flüssigkeitsgefüllte Lumen bilden.

Übertragen Sie die Neurosphären nach der Inkubation in einen Spinnerkolben, der vorgewärmte Organoidmedien des Gehirns enthält. Inkubieren Sie unter Rühren, um die Sauerstoff- und Nährstoffdiffusion zu verbessern und das Zellwachstum zu fördern.

Wachstumsfaktoren und niedermolekulare Inhibitoren in Medien fördern die neuronale Differenzierung und entwickeln sich zu Zellen bestimmter Hirnregionen, die reife Hirnorganoide bilden.

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