Generierung von induzierten pluripotenten Stammzell-abgeleiteten zerebralen Organoiden

Nehmen Sie Kolonien von induzierten pluripotenten Stammzellen (iPSCs), die auf einer Stützmatrix kultiviert werden.

Fügen Sie eine Lösung hinzu, die Enzyme enthält, um die Kolonien in einzelne Zellen zu dissoziieren.

Übertragen Sie die Zellen in ein Röhrchen, zentrifugieren Sie sie und entsorgen Sie den Überstand.

Resuspendieren Sie die iPSCs in einem Wachstumsmedium.

Übertragen Sie die Zellen in eine Mikroplatte, die biokompatible Polymerfasern enthält.

Zentrifugieren Sie, um iPSCs auf dem Polymergerüst zu aggregieren und Embryoidkörper oder EBs zu bilden.

Übergang zu einem neuronalen Induktionsmedium, das die Proliferation und Differenzierung von iPSCs in neurale Stammzellen, Vorläuferzellen und unreife Neuronen fördert.

Nach der Inkubation durchlaufen die Zellen eine Selbstorganisation.

Legen Sie die Embryoidkörper auf ein Noppenblatt und fügen Sie Tropfen hinzu, die Proteine der extrazellulären Matrix enthalten.

Inkubieren Sie, um die Matrix zu verfestigen und die EBs einzubetten.

Übertragen Sie die EBs in eine Mikroplatte, die ein neuronales Erhaltungsmedium enthält. Ausbrüten.

Die EBs durchlaufen eine zelluläre Proliferation, um Vorsprünge und Knospen zu bilden und sich zu re