Entwicklung von Neuronenkugeln mit einer Hanging Drop Culture-Technik

Beginnen Sie mit einer Einzelzellsuspension von embryonalen neuronalen Vorläuferzellen der Maus in einem neurobasalen Medium.

Das Medium enthält essentielle Nährstoffe zur Aufrechterhaltung der Zelllebensfähigkeit.

Geben Sie kleine Tropfen dieser Zellsuspension auf den Deckel einer nicht klebenden Kulturschale und achten Sie darauf, dass sie in Abständen zueinander stehen.

Drehen Sie den Deckel um, was zur Bildung von hängenden Tropfen führt.

Positionieren Sie den Deckel über der Schale mit einem Puffer, um eine feuchte Umgebung zu schaffen, die eine Verdunstung des Mediums verhindert, und inkubieren Sie.

Innerhalb der hängenden Tropfen behält die Oberflächenspannung der Flüssigkeit die Form des Tropfens bei.

Dieser Formeinschluss beschränkt die Zellen auf einen begrenzten Raum, ohne sich auszubreiten.

Zusätzlich lenken die Gravitationskräfte in den Tropfen die Zellen in den unteren Bereich.

Wenn neuronale Vorläuferzellen in engeren Kontakt kommen, aggregieren sie spontan zu einer dreidimensionalen Struktur, die als Neuronenkugel bekannt ist.

Zur Vorbereitung von Neuronenkugeln stellen Sie die Zelldichte in dieser Zellsuspension mit NGB-Medium auf 1 Million Zellen pro Milliliter ein. Geben Sie 7 Milliliter PBS in den unteren Teil der Kulturschalen. Kultivieren Sie die kortikalen Neuronen als hängende 10-Mikroliter-Tropfen mit 10.000 Zellen pro Tropfen in den oberen Lidern von 10-Zentimeter-Kulturschalen. Bewahren Sie die Schalen drei Tage lang in einem Inkubator bei 37 Grad Celsius und 5 % CO₂ unter befeuchteten Bedingungen auf, um die Bildung von Neuronenkugeln zu ermöglichen.