Kultivierung von Neuronen-Explantaten von Maus-Spiralganglien auf Multielektroden-Arrays

Beginnen Sie mit einem präparierten Innenohrsegment der Maus, das das Ganglion spirale und das Corti-Organ enthält, spezialisierte Strukturen des Innenohrs.

Das Corti-Organ enthält Haarzellen, die als Rezeptoren für akustische Signale fungieren.

Das Ganglion spirale besteht aus Neuronenzellkörpern, die Prozesse zur Innervation der Haarzellen des Corti-Organs verlängern.

Trennen Sie das Ganglion spirale vom Corti-Organ und entnehmen Sie daraus kleine Gewebeschnitte oder Explantate.

Nehmen Sie nun ein mit extrazellulärer Matrix beschichtetes Multielektrodenarray, das Nährmedien enthält.

Platzieren Sie die Explantate auf dem Array und positionieren Sie das Corti-Organ außerhalb des Elektrodenbereichs. Ausbrüten.

Die Explantate heften sich an die beschichtete Mehrelektrodenoberfläche.

Fügen Sie regelmäßig Medien hinzu, die Serumproteine und Wachstumsfaktoren enthalten.

Während der Kultivierung bieten die Medienkomponenten und das Corti-Organ eine neurotrophe Unterstützung und fördern das Wachstum von Neuriten aus den Neuronen der Spiralganglien über die Multielektrode.

Trennen Sie das Corti-Organ vom Spiralganglion in modiolus, indem Sie den basalen Teil des Spiralganglions und das Corti-Organ mit einer Pinzette halten und das Corti-Organ langsam von der Basis bis zur Spitze abwickeln. Schneiden Sie dann die lateralen Explantate mit einer Pinzette oder einer feinen Mikrodissektionsschere oder einem Messer aus dem Spiralganglion ab.

Übertragen Sie nun die Explantate des Spiralganglion und das Corti-Organ auf das MEA. Platzieren Sie dann SG-Explantate über dem Elektrodenbereich und dem Corti-Organ, etwa 5 Millimeter vom Elektrodenbereich entfernt. Platzieren Sie die Explantate und das Corti-Organ auf den MEAs und vermeiden Sie dabei eine Schädigung des Gewebes. Legen Sie die MEAs anschließend vorsichtig in den Inkubator und kultivieren Sie sie bei 37 Grad Celsius und 5 % CO₂.

Am nächsten Tag untersuchen Sie die Explantate visuell auf ihre Befestigung an den MEAs. Fügen Sie dann an fünf aufeinanderfolgenden Tagen täglich 100 Mikroliter Nährmedium mit 10 % FBS und BDNF hinzu. Fügen Sie an Tag 6 2 Milliliter Nährmedium hinzu, das 10 % FBS und 5 Nanogramm pro Milliliter BDNF enthält, und kultivieren Sie das Gewebe für weitere 13 Tage.