Isolierung und Kultivierung von Mikroglia aus Rattengehirnen mit serumfreien Medien

Nehmen wir ein durchblutetes Rattengehirn. In kleine Stücke hacken.

Homogenisieren Sie das Gewebe in einem Puffer, um Zellen, einschließlich Mikroglia, freizusetzen.

Sobald sich das unverdaute Gewebe abgesetzt hat, sammeln Sie den Überstand mit den Zellen und fügen Sie einen Myelin-Trennpuffer hinzu.

Mischen Sie den Inhalt und zentrifugieren Sie, um die Zellen von Myelin und Ablagerungen zu trennen. Entfernen Sie die Myelin-Trümmer-Schicht und den Überstand.

Resuspendieren Sie die Zellen in Puffer und pipettieren Sie, um die Klumpen zu trennen.

Die Suspension wird durch ein Sieb geleitet, um verbleibende Zellaggregate zu entfernen.

Übertragen Sie die gefilterten Zellen auf eine Kulturplatte, die mit Mikroglia-spezifischen monoklonalen Antikörpern beschichtet ist. Inkubieren, um die Adhäsion der Mikroglia zu erleichtern.

Mit Puffer waschen, um nicht anhaftende Zellen zu entfernen. Trypsin hinzufügen und inkubieren, um die Mikroglia zu lösen.

Entfernen Sie Trypsin.

Fügen Sie serumfreie Medien hinzu. Inkubieren Sie auf Eis, um die Wechselwirkungen zwischen Zellen und Substrat zu schwächen.

Pipettieren und die Suspension in einem Röhrchen auffangen. Zentrifugieren und den Überstand ent