Selektive Entnahme von Mikroglia aus einer Kleinhirn-Neuronenkultur der Ratte

Nimm ein geerntetes Kleinhirn der Ratte und hacke es in Fragmente.

Übertragen Sie die Fragmente in ein Röhrchen mit Trypsin und inkubieren Sie.

Trypsin verdaut die extrazelluläre Matrix des Gewebes und lockert die Kleinhirn-Körnerneuronen sowie nicht-neuronale Zellen wie Mikroglia und Astrozyten.

Fügen Sie einen Puffer hinzu, der einen Trypsin-Inhibitor und DNase enthält. Der Inhibitor inaktiviert Trypsin, während DNase kontaminierende DNA abbaut.

Zentrifugieren und den Überstand verwerfen.

Resuspendieren Sie das Gewebe in einem Puffer, der den Inhibitor und DNase enthält, und dissoziieren Sie es mechanisch, um eine Einzelzellsuspension zu bilden.

Überlagern Sie die Suspension mit einer proteinhaltigen Pufferlösung.

Zentrifugieren Sie und entsorgen Sie den Überstand mit Zelltrümmern.

Resuspendieren Sie die Zellen in Medien und säen Sie sie auf Poly-L-Lysin-beschichteten Deckgläsern, um die zelluläre Anheftung zu erleichtern.

Entfernen Sie das Medium. Waschen Sie die Zellen mit frischen Medien und fügen Sie dann Medien hinzu, die einen Zellzyklushemmer enthalten, um die Proliferation von Gliazellen zu verhindern.

Ersetzen Sie die Hälfte des Mediums durch frische Medien, die einen Ly