Etablierung einer dreidimensionalen Kultur von Gliazellen aus dem Rattengehirn

Nehmen Sie eine Mikroplatte mit einer adhärenten Kultur von Gliazellen, die aus einem Rattengehirn stammen. Die Kultur enthält Astrozyten, Mikroglia und Oligodendrozyten.

Entfernen Sie das Medium, inkubieren Sie es mit einer Enzymlösung, um die Zellen zu lösen, und geben Sie sie dann in ein Röhrchen.

Zentrifugieren und den Überstand mit Zellresten entfernen. Suspendieren Sie die Zellen in einem warmen Medium.

Trituieren Sie mit einer Spritze, um Zellklumpen aufzubrechen, und filtrieren Sie mit einem Sieb, um eine einzellige Suspension zu erhalten.

Fügen Sie ein photovernetztes Biopolymer, Vernetzungsmittel und extrazelluläre Matrixkomponenten hinzu.

Gießen Sie die Mischung in eine Form, die an einem Deckglas befestigt ist. Setzen Sie die Mischung hochintensivem Licht aus, um eine Vernetzung zu induzieren, ein Gel zu bilden und die Gliazellen einzukapseln.

Entfernen Sie die Form und legen Sie die Deckgläser in eine Mikroplatte. Fügen Sie ein warmes Medium hinzu und inkubieren Sie das Gel unter physiologischen Bedingungen.

Die Zellen vermehren sich innerhalb der unterstützenden extrazellulären Matrix und bilden ein zelluläres Netzwerk, wodurch eine dreidimensionale Kultur von Gliazel