Eine In-vitro-Methode zur Erzeugung von Astrozyten-Gerüsten in Hydrogel-Mikrosäulen

Man nehme eine Kulturschale, in der sich ein Mikrosäulenschiffchen befindet, das aus Hohlröhrchen mit definiertem Durchmesser besteht.

Die Mikrosäulen aus einem Hydrogel sind mit einem Puffer gefüllt, um ein Austrocknen zu verhindern.

Entfernen Sie unter einem Stereomikroskop den Puffer und fügen Sie eine eiskalte Kollagenlösung hinzu, einen Bestandteil der extrazellulären Matrix.

Führen Sie ein Medium entlang des Innenrandes der Schale ein, um die Hydratation der Säule aufrechtzuerhalten. Inkubieren Sie unter physiologischen Bedingungen, damit das Kollagen polymerisiert und eine Beschichtung in den Mikrosäulen bildet.

Fügen Sie Astrozyten in die Mikrosäulen hinzu und inkubieren Sie, um die Adhäsion der Astrozyten an Kollagen zu fördern.

Füllen Sie anschließend die Schale mit dem Medium und halten Sie sie unter physiologischen Bedingungen.

Aufgrund des schmalen Durchmessers der Mikrosäulen erhalten die Astrozyten eine bipolare Morphologie mit Fortsätzen, die sich über die gesamte Länge erstrecken.

Im Laufe der Zeit ordnen sich die Astrozyten selbst zu einem dreidimensionalen Gerüst zusammen, das dichte Bündel von Astrozytenfortsätzen enthält.

Das mit Hydrogel ummantelte Astrozyteng