Erzeugung einer neuronalen Kultur mit extrem niedriger Dichte unter Verwendung einer neuronalen Feederschicht mit hoher Dichte

Beginnen Sie mit zwei Multi-Well-Platten: eine mit einem geätzten Boden, der mit einem Polymer beschichtet ist, und die andere mit einem polymerbeschichteten Deckglas.

Säen Sie eine Suspension der embryonalen Neuronen mit hoher Dichte in die Platte mit dem geätzten Boden ein. Fügen Sie dem Deckglas eine Neuronensuspension mit extrem niedriger Dichte hinzu.

Inkubieren, um die neuronale Bindung an die Polymere zu ermöglichen.

Entfernen Sie das Deckglas und legen Sie es über die Neuronenkultur mit hoher Dichte, so dass sich die Neuronen gegenüberstehen können.

Die geätzte Oberfläche mit erhabenen Strukturen schafft einen Mikroraum, der Neuronen unterschiedlicher Dichte trennt.

Die Kultur mit hoher Dichte fungiert als Feeder-Schicht und sezerniert den neuronalen Wachstumsfaktor.

Aufgrund des begrenzten Diffusionsraums sammeln sich die Wachstumsfaktoren um die Neuronen herum an, was ihr Wachstum und die Entwicklung neuronaler Projektionen erleichtert.

Einführung eines neurobasalen Mediums mit Cytosin-Arabinosid, das selektiv das Wachstum der nicht-neuronalen Zellen hemmt.

Füllen Sie regelmäßig mit einem frischen neurobasalen Medium auf, um die neuronale Kultur zu erhalten.

Platzieren Si