Aufreinigung von CD31⁺ endothelialen Vorläuferzellen mittels magnetisch aktivierter Zellsortierung

Nehmen Sie eine adhärente Kultur von endothelialen Vorläuferzellen oder EPCs, Vorläufern von mikrovaskulären Endothelzellen des Gehirns.

Die Kultur, die durch Differenzierung pluripotenter Stammzellen gewonnen wurde, besteht aus EPCs, die für den Oberflächenmarker CD31 positiv sind, und kontaminierenden CD31-negativen Zellen.

Inkubieren Sie mit einem Dissoziationsreagenz, um die Zellen abzulösen, und filtern Sie, um eine Einzelzellsuspension zu erhalten.

Fügen Sie ein Medium hinzu, um die Enzyme zu neutralisieren, zentrifugieren Sie, um den Überstand zu verwerfen, und resuspendieren Sie die Zellen in einem Puffer.

Inkubieren Sie mit einem blockierenden Reagenz, um die zellulären Fc-Rezeptoren zu hemmen und eine unspezifische Markierung zu verhindern.

Fügen Sie einen Fluorophor-konjugierten Antikörper hinzu, der spezifisch für CD31 ist, und inkubieren Sie, um die EPCs zu markieren.

Zentrifugieren und ungebundene Antikörper verwerfen. Inkubieren Sie mit Antikörperkomplexen, die einen Antikörper enthalten, der an die Fluorophore bindet.

Führen

Sie polymerbeschichtete magnetische Nanopartikel ein und inkubieren Sie, so dass die Nanopartikel an den zweiten Antikörper des Komplexes binde