Isolierung von neuralen Stammvorläuferzellen aus der periventrikulären Region des Rückenmarks einer erwachsenen Ratte
JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 4:30 Min. • July 8th, 2025
Beginnen Sie mit dem periventrikulären Rückenmarksgewebe einer erwachsenen Ratte, einer Region, die reich an neuralen Stamm-/Vorläuferzellen ist.
Übertragen Sie das Gewebe in eine Lösung, die Papain und DNase enthält.
Papain, ein proteolytisches Enzym, spaltet die extrazelluläre Matrix des Gewebes, während DNase kontaminierende DNA abbaut, die von geschädigten Zellen freigesetzt wird.
Dissoziieren Sie das Gewebe mechanisch, um eine einzellige Suspension zu erhalten.
Übertragen Sie die Suspension in ein Röhrchen und zentrifugieren Sie sie. Entfernen Sie den Überstand. Resuspendieren Sie die Zellen in einer Lösung, die das Albuminprotein und einen Proteasehemmer enthält.
Albumin und der Hemmstoff deaktivieren Papain.
Schichten Sie die Zellsuspension über eine Lösung, die Albumin und einen Proteasehemmer enthält.
Der Dichteunterschied zwischen den Schichten bildet einen diskontinuierlichen Dichtegradienten.
Zentrifugieren, um die intakten Zellen abzusetzen, während Zellmembranfragmente an der Grenzfläche verbleiben.
Entsorgen Sie den Überstand. Resuspendieren Sie die Zellen in Wachstumsmedien und plattieren Sie sie.
Die Wachstumsfaktoren fördern selektiv die Proliferation der neuralen
Sehen Sie sich das vollständige Transkript an und erhalten Sie Zugang zu Tausenden wissenschaftlicher Videos