Differenzierung embryonaler Stammzellen der Maus zu einer vernetzten Neuronenpopulation

Embryonale Stammzellen von Mäusen in einer Schale mit geringer Bindung säen, die Differenzierungsmedien enthält.

Inkubieren Sie unter Rotation, um die zelluläre Aggregation und Differenzierung zu einer neuronalen Linie zu erleichtern.

Übertragen Sie die Zuschlagstoffe in ein Rohr und lassen Sie sie durch die Schwerkraft absetzen. Entsorgen Sie die Medien.

Resuspendieren Sie die Aggregate und überführen Sie sie in die ursprüngliche Schale, die Differenzierungsmedien enthält, die mit Retinsäure ergänzt sind.

Retinsäure induziert die neuronale Genexpression und löst die Differenzierung in neurale Vorläuferzellen aus.

Übertragen Sie die Aggregate in ein Rohr. Entfernen Sie das Medium und fügen Sie Trypsin hinzu, um die Aggregate zu dissoziieren.

Fügen Sie einen Inhibitor hinzu, um das Trypsin zu neutralisieren.

Wiederholtes Pipettieren zur Gewinnung einer homogenen Zellsuspension. Filtern Sie die Suspension, um Zuschlagstoffe zu entfernen.

Zentrifugieren und den Überstand entfernen. Resuspendieren Sie die Zellen in Medien.

Säen Sie die Zellen auf einer polymerbeschichteten Schale, um die Zelladhäsion zu erleichtern.

Entfernen Sie das Medium. Fügen Sie frische Medien hinzu, die Wachstum