JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 2:05 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie ein Mausgehirn in einem eiskalten Puffer und entfernen Sie den hinteren Teil, der das Kleinhirn enthält, und den vorderen Teil mit dem medialen präfrontalen Kortex (mPFC).
Der mittlere Teil enthält Amygdala-Regionen, die Emotionen wie Angst und Unruhe verarbeiten.
Schieben Sie den Gehirnabschnitt auf ein Filterpapier, um den überschüssigen Puffer zu entfernen.
Kleben Sie es auf eine Bühne und befestigen Sie einen Agarblock hinter dem Abschnitt, um zu verhindern, dass er sich beim Schneiden verschiebt.
Platzieren Sie diesen Tisch in einer Vibrationsschneidkammer mit dem eiskalten Puffer.
Schneiden Sie den Schnitt ab, um eine dünne koronale Hirnscheibe zu erhalten.
Dadurch werden die Amygdala-Regionen freigelegt, die synaptische Verbindungen zwischen den Amygdala-Neuronen und den Projektionen der mPFC-Neuronen enthalten, die die Reaktionen der Amygdala regulieren.
Schneide die Scheibe in zwei Hälften, die jeweils eine Amygdala-Region enthalten.
Übertragen Sie sie anschließend in eine Grenzflächenkammer, die sauerstoffhaltige künstliche Zerebrospinalflüssigkeit enthält.
Die Scheiben werden bei physiologischer Temperatur zurückgewonnen, um die Lebensfähigkeit der Neuronen zu erhalten.
Nachdem Sie das Gehirn entnommen haben, verwenden Sie ein Skalpell, um das Kleinhirn und den inneren Teil des Gehirns zu entfernen, und kühlen Sie dann den mittleren Teil des Gehirns wie zuvor in eiskalter Schneidlösung ab. Tupfen Sie das Gehirn mit Filterpapier ab und kleben Sie es dann auf das Vibratomstadium.
Befestigen Sie auch hier einen zusätzlichen Agarblock hinter dem Gehirn, um die Stabilität beim Schneiden zu gewährleisten. Nachdem Sie den Tisch in die mit 4 Grad Celsius gefüllte Schneidkammer eingesetzt haben, schneiden Sie 320-Mikron-Koronalschnitte durch die Amygdala. Schneiden Sie sie in zwei Hälften und sammeln Sie die Abschnitte wie zuvor in der Schnittstellenkammer.