Etablierung einer Müller-Gliazellkultur aus der Netzhaut von Mäusen

Nehmen wir die Netzhaut von Mäusen, die Müller-Glia- oder MG-Zellen und Neuronen enthalten.

Legen Sie sie in eine Dissoziationslösung mit Verdauungsenzymen und inkubieren Sie sie unter leichtem Schaukeln, um eine gleichmäßige Enzymverteilung zu gewährleisten.

Diese Enzyme brechen die extrazelluläre Matrix auf und lösen einzelne Zellen ab.

Pipettieren Sie die Netzhaut mehrmals auf und ab, um die Zellen freizusetzen.

Fügen Sie einen Inhibitor hinzu, um die Enzymaktivität zu stoppen, und zentrifugieren Sie dann.

Entsorgen Sie den Überstand.

Resuspendieren Sie die Zellen in Medien, die einen für MG-Zellen spezifischen Wachstumsfaktor enthalten.

Übertragen Sie die Zellen in eine Vertiefung und inkubieren Sie.

Im Laufe der Zeit erleichtert der Wachstumsfaktor in den Medien das Wachstum und die Vermehrung von MG-Zellen, während die sich nicht teilenden neuronalen Zellen zugrunde gehen.

Entfernen Sie das Medium. Mit einem Salzpuffer waschen.

Inkubieren Sie mit einem Verdauungsenzym, um die Zellen aus der Vertiefung zu lösen.

Sammeln Sie die Zellen in einem Röhrchen und zentrifugieren Sie sie.

Entsorgen Sie den Überstand mit den abgestorbenen neuronalen Zellen.

Resuspendieren Sie die MG-Zel