Differenzierung von otischen Vorläuferzellen in sensorische Epithelzellen mit anschließender Immunfärbung

Kultivieren Sie immortalisierte multipotente otische Vorläuferzellen (iMOP) in Medien.

Wachstumsfaktoren in den Medien erleichtern die Proliferation von iMOPs und die Koloniebildung, wodurch Otosphären entstehen.

Sammeln Sie die Otosphären und lassen Sie sie durch die Schwerkraft absetzen.

Entfernen Sie die Medien und fügen Sie Differenzierungsmedien hinzu, denen Wachstumsfaktoren fehlen. Plattieren Sie die Otosphären.

Das Fehlen von Wachstumsfaktoren initiiert die iMOP-Differenzierung in sensorische Epithelzellen.

Sammeln Sie die differenzierten Otosphären und lassen Sie sie sich absetzen.

Entfernen Sie das Medium und fügen Sie ein Fixiermittel hinzu, um die Zellmorphologie zu erhalten.

Fügen Sie anschließend ein Reinigungsmittel hinzu, um die Zell- und Kernmembranen zu permeabilisieren.

Fügen Sie einen Blockierungspuffer hinzu, um eine unspezifische Antikörperbindung zu verhindern.

Einführung von Primärantikörpern, die auf einen bestimmten Differenzierungsmarker abzielen.

Fügen Sie fluorophorkonjugierte Sekundärantikörper hinzu, die auf die primären Antikörper abzielen, fluoreszenzmarkiertes Phalloidin zur Färbung von Aktin und einen DNA-bindenden Farbstoff zur Färbung der Zellke