Isolierung von murinen retinalen Ganglienzellen mittels fluoreszenzaktivierter Zellsortierung

Legen Sie eine Mausnetzhaut auf ein angefeuchtetes Zellsieb und mazerieren Sie in kreisenden Bewegungen, um die Netzhautzellen von der extrazellulären Matrix zu trennen.

Füllen Sie das Sieb in ein Auffangröhrchen.

Geben Sie einen Phosphatpuffer und eine Serumlösung in das Sieb, um die Zellen zu waschen und zu sammeln.

Zentrifuge, um die Zellen abzusetzen. Der Überstand wird verworfen und die Zellen werden in einem Phosphatpuffer und einer Serumlösung resuspendiert.

Fügen Sie blockierende Antikörper hinzu, die an Fc-Rezeptoren auf Zellen binden und so eine unspezifische Bindung von Zielantikörpern verhindern.

Fügen Sie als Nächstes fluoreszenzmarkierte und nicht markierte Primärantikörper hinzu, die an spezifische Zelloberflächenmarker auf verschiedenen Zelltypen binden.

Waschen, um ungebundene Antikörper zu entfernen.

Fügen Sie einen fluoreszenzmarkierten Sekundärantikörper hinzu, um an den nicht markierten Primärantikörper zu binden.

Waschen, um ungebundene Antikörper zu entfernen.

Führen Sie eine fluoreszenzaktivierte Zellsortierung (FACS) durch, um die unterschiedlichen Fluoreszenzsignale der markierten Zellen zu erfassen und die retinalen Ganglienzellen aus verschiedenen retina