Isolierung und Kultivierung von primären embryonalen Dopamin-Neuronen aus dem Mittelhirn der Maus

Nehmen Sie Bodengewebe des Mittelhirns, das aus der ventralen Region des Mittelhirns von Mausembryonen isoliert wurde.

Das Gewebe ist reich an sich entwickelnden Dopamin-Neuronen, die den Neurotransmitter Dopamin freisetzen.

Fügen Sie eine Enzymlösung hinzu, um die Gewebematrix aufzubrechen und dadurch die Zellen zu lockern.

Fügen Sie eine Serumlösung hinzu, die DNase I enthält, und dissoziieren Sie das verdaute Gewebe mechanisch, um eine Zellsuspension zu erzeugen. Die Serumproteine hemmen die Enzyme, während DNase I die bei der Zelllyse freigesetzte extrazelluläre DNA abbaut und so die Zellverklumpung verhindert.

Lassen Sie die Gewebetrümmer absetzen und übertragen Sie die suspendierten Zellen in ein frisches Röhrchen.

Zentrifugen und entfernen Sie den Überstand, dann resuspendieren Sie die Zellen in einem Dopamin-Neuronenmedium (DPM).

Nehmen Sie eine Mikrotiterplatte, die mit einem Zellkultursubstrat in der Mitte der Vertiefungen beschichtet ist, wodurch Mikroinseln entstehen.

Bringen Sie die Zellen in die Mitte der Mikroinseln, um sie in hoher Dichte zu kultivieren.

Inkubieren, damit die Zellen an den Mikroinseln haften können.

Füllen Sie die Vertiefungen mit DPM und inkubieren