Wirkstoff-Mikroinjektion mit elektrophysiologischer Aufzeichnung in einem Rattengehirn

Beginnen Sie mit einer Injektionsrode, einem elektrodenhaltigen Injektionssystem. Diese besteht aus einer Mikronadel und einer Silberdrahtelektrode, die in eine Glasmikropipette eingeführt werden.

Füllen Sie die Injektionsrode mit einer Testlösung, die einen Farbstoff enthält, um die Verfolgung der Ausbreitung des Medikaments im Gehirn zu erleichtern.

Befestigen Sie eine mit Mineralöl gefüllte Spritze an der Injektionsrode. Wischen Sie überschüssige Flüssigkeit ab.

Befestigen Sie diese Injektionsrode an einer stereotaktischen Einheit und verbinden Sie sie mit einem Mikropumpensystem.

Positionieren Sie die Injektionsrode auf der Zielhirnregion einer anästhesierten Ratte mit einem chirurgischen Loch im Schädel.

Senken Sie die Injektrode allmählich ab, um in den Zielbereich einzudringen.

Stoppen Sie das Einführen, wenn Sie spezifische elektrische Signale erhalten, die die optimale Platzierung der Injektrode bestätigen.

Decken Sie den freiliegenden Schädel mit warmem Agar ab, um ein Austrocknen des Gewebes zu verhindern.

Lassen Sie das Hirngewebe sich stabilisieren.

Injizieren Sie die gewünschte Dosierung des Arzneimittels.

Zeichnen Sie elektrische Signale auf, um die neuronale Aktivität als Reaktion auf das verabreichte Medikament zu überwachen.

Bereiten Sie die Injektionsrode vor, indem Sie zuerst eine 5- bis 10-Mikroliter-Spritze mit Mineralöl füllen. Bereiten Sie als nächstes das gewünschte Medikament mit einem Farbstoff in physiologischer Kochsalzlösung vor. Hier werden 0,5 % Chicago Sky Blue mit 300 mikromolaren GABA gemischt. Füllen Sie nun die Injektionspipette, indem Sie zuerst eine 1-Milliliter-Spritze mit der vorbereiteten Lösung befüllen und dann die Pipette mit der Spritze befüllen.

Halten Sie beim Entfernen der Spritze leichten Druck auf den Kolben, damit ein Vakuum die Lösung nicht aus der Injektionsrode entfernt. Prüfen Sie, ob Flüssigkeit an möglichen Leckstellen austritt. Tupfen Sie überschüssige Flüssigkeit ab und prüfen Sie erneut auf Undichtigkeiten. Befestigen Sie nun die Mikrospritze mit Mineralöl an der Injektionsrode. Wischen Sie dann überschüssige Lösung mit Gaze ab.

Überprüfen Sie die Injektionsspitze. Es sollte möglich sein, kleine Tropfen Lösung hindurchfließen zu lassen. Andernfalls ist es verstopft oder undicht. Montieren Sie nun die Injektionsrode sicher an einem Mikropumpensystem. Verschieben Sie dann die Position der Injektionsrode auf die Zielkoordinaten und senken Sie die Elektrode auf den Colliculus superior, der durch die Aufzeichnung visuell evozierter Potentiale identifiziert werden kann.

Während die Elektrode abgesenkt ist, üben Sie einen kleinen Überdruck aus, indem Sie eine niedrige Injektionsrate anwenden, um ein Verstopfen zu vermeiden. Unterbrechen Sie die Injektion, wenn die Struktur erreicht ist. Nach dem Einführen der Injektionsrode den freiliegenden Kortex mit warmem Agar bedecken, um ein Austrocknen zu verhindern. Warten Sie nach dem endgültigen Platzieren der Elektrode 30 Minuten, um die Stabilisierung des die Elektrode umgebenden Gewebes zu ermöglichen. Injizieren Sie dann 400 bis 800 Nanoliter Lösung mit einer Geschwindigkeit von 40 Nanolitern pro Minute, bis die neuronale Aktivität im Colliculus superior inaktiviert ist.

Die Elektrode sollte während der Injektion der Hemmlösung eine Verringerung der Spikes aufweisen.