Untersuchung der Erregbarkeit fluoreszierender Neuronen mit einer Ganzzell-Patch-Klemme
JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 3:06 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie einen immobilisierten transfizierten koronalen Mausschnitt in einer Aufnahmekammer, die mit aCSF perfundiert ist.
Die Scheibe enthält eine spärliche pyramidale Neuronenpopulation, die ein Zielenzym und ein fluoreszierendes Protein exprimiert.
Bauen Sie eine Aufzeichnungspipette zusammen, die aus einer intrazellulären Lösung und einer Elektrode besteht, die mit einem Verstärker zur Messung neuronaler Signale verbunden ist.
Identifizieren Sie mikroskopisch den Zielgewebebereich und lokalisieren Sie ein fluoreszierendes Neuron.
Üben Sie positiven Druck auf die Pipette aus, um ein Verstopfen zu verhindern, und schieben Sie sie zum Zielneuron weiter.
Der Überdruck bewirkt bei Kontakt eine leichte Vertiefung auf der neuronalen Membran.
Lassen Sie den Druck ab und bilden Sie eine dichte Abdichtung zwischen der Membran und der Spitze.
Stellen Sie das Haltepotenzial auf einen konstanten negativen Wert ein, um das Neuron zu stabilisieren.
Üben Sie einen kurzen Unterdruck aus, um die Membran zu durchbrechen, das Zytoplasma mit dem Inneren der Pipette zu verbinden und eine Ganzzellkonfiguration herzustellen.
Wechseln Sie in den Stromzangenmodus und legen Sie positive Stromimpulse an
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