A. mesenterica Kontraktion und Entspannung Studies Verwendung automatisierter Draht Myographie

Bei diesem Verfahren werden Puppensalz-empfindliche und salzresistente Ratten verwendet, um die Reaktivität der mesenterialen Widerstandsarterien unter Phenylephrin-Spannung mit extrazellulärem Kalzium zu vergleichen. Dies wird erreicht, indem zunächst die mesenteriale Arkade von den Tieren isoliert und die Äste der Widerstandsarterie präpariert werden. Nächster. Der erste von zwei Edelstahldrähten wird durch ein kurzes Segment der präparierten Arterie gefädelt und das Gefäß in die Graphenkammer eingebaut.

Dann wird der zweite Edelstahldraht parallel zum ersten Draht durch das Gefäßlumen gefädelt. Als nächstes wird das montierte Gefäß auf einen normalisierten Innenumfang gedehnt. Der letzte Schritt des Verfahrens besteht darin, das Gefäß zu reaktivieren, indem es mit wiederholten Anwendungen von Phenylephrin herausgefordert und mit kumulativen Anwendungen von Kalzium entspannt wird.

Letztlich zeigen die Ergebnisse Änderungen der Spannung im Gefäß, die in eine Calcium-Reaktionskurve umgewandelt und zur Bestimmung von EC 50-Werten verwendet werden können. Zum Vergleich. Wir hatten die Idee, diese Methode zu verwenden, als wir entdeckten, dass das nev-Netzwerk von Ratten-Masonary-Batterien einen gpro-Kupfer-Calcium-Sens-Rezeptor exprimiert.

Das kann auf die gleiche Weise untersucht werden wie bittere AIC-Rezeptoren, die durch Agonisten aktiviert werden. Im Allgemeinen können Personen, die mit dieser Methode noch nicht vertraut sind, Schwierigkeiten haben, da das Endothel und die glatten Muskelschichten klein sind. Gefäße können leicht beschädigt werden.

In diesem Fall können die mechanischen Eigenschaften dieser Gefäße beeinträchtigt werden. Bereiten Sie zunächst den Arbeitsbereich und die chirurgischen Instrumente vor. Legen Sie ein betäubtes Tier auf den Rücken und wischen Sie den Bauch mit Alkohol ab.

Nach einer Mittellinien-Laparotomie entfernen Sie mit einer Schere etwa 85 Zentimeter des Darms, einschließlich der Arteria mesenterica superior. Schneiden Sie das proximale Ende in der Nähe der Pylori und das distale Ende in der Nähe des ileozökalen Übergangs. Legen Sie den herausgeschnittenen Schnitt in eine beschichtete Petrischale, die physiologische Salzlösung oder PSS bei Raumtemperatur enthält.

Stecken Sie das proximale Ende des Darms nach rechts und stecken Sie dann den Rest des Darms gegen den Uhrzeigersinn fest. Als nächstes präparieren Sie ein Segment der Mesenterialarterie, das die Äste zwei und drei und ein Stück des Darms vom proximalen Ende enthält. Identifizieren Sie den V-förmigen Ast der Arteria mesenterica und präparieren Sie ihn von der Vene weg.

Ziehen Sie Fett- und Bindegewebe mit einer Pinzette sanft ab, um einen direkten Kontakt mit der Arterie zu vermeiden. Um mit der Montage des Gefäßes zu beginnen, schneiden Sie zwei etwa zwei Millimeter lange Arteriensegmente durch. Die Spitze eines vier Zentimeter großen, 40 Mikrometer großen, wolframfreien Edelstahldrahtes kann verwendet werden, um das Lumen der Arterie zu öffnen.

Führen Sie dann den Draht mit einer feinen Pinzette in das Lumen jeder Arterie ein. Achten Sie darauf, das Endothel nicht zu beschädigen, und füllen Sie die Myotransplantatkammer mit PSS bei 37 Grad Celsius. Befördern Sie das Gewindegefäßsegment mit einer Pinzette in die Kammer.

Übertragen Sie als Nächstes das herausgeschnittene proximale Gefäßsegment in die Myographenkammer und ziehen Sie das Ende entlang des Drahtes, um es in das Gefäß einzuführen. Vermeiden Sie es, das Gefäß zu dehnen. Befestigen Sie das nahe Ende des Drahtes gegen den Uhrzeigersinn unter der Befestigungsschraube an der rechten Backe, die mit dem Mikrometer verbunden ist.

Fassen Sie das freie Ende des Drahtes mit einer Pinzette auf und befestigen Sie es im Uhrzeigersinn unter der äußersten Befestigungsschraube an der rechten Backe, stellen Sie sicher, dass sich das Gefäßsegment entlang des Drahtes im Spalt zwischen den Backen befindet, ohne den Kiefer selbst zu berühren. Schrauben Sie die Backen auseinander. Richten Sie den zweiten Draht parallel zum Gefäß aus und führen Sie ihn in das hintere Ende des Lumens ein.

Führen Sie den Draht in einer Bewegung vorsichtig durch das Lumen des Gefäßsegments, wobei Sie den bereits montierten Draht als Führung verwenden. Halten Sie den Draht etwa einen Zentimeter vom Gefäß entfernt, um ihn während des Manövers nicht zu dehnen und das Endothel nicht zu berühren. Schrauben Sie die Backen zusammen und stellen Sie sicher, dass sich der zweite Befestigungsdraht unter dem ersten an der rechten Hand befestigten bewegt

Befestigen Sie das nahe Ende des zweiten Drahtes im Uhrzeigersinn unter der nahen Befestigungsschraube der linken Backe, die mit dem Wandler verbunden ist. Befestigen Sie das hintere Ende des Drahtes unter der Befestigungsschraube an der linken Backe und ziehen Sie ihn fest, um den Draht zu dehnen. Sobald die Montage abgeschlossen ist, warten Sie 30 Minuten für die Äquilibrierung bei 37 Grad Celsius.

Nach der Äquilibrierung wird der Motor aus dem Montagemenü zurückgesetzt und der Normalisierungsvorgang eingeleitet, der das Gefäß auf einen normalisierten Innenumfang dehnt. Öffnen Sie zunächst das Normalisierungsmenü und stellen Sie den Ziel-Transmuraldruck auf 13,3 Kilopascal ein. Legen Sie als Nächstes die Dauer der einzelnen Normalisierungsschritte auf 60 Sekunden fest.

Das Verhältnis von IC eins zu IC 100 sollte 0,9 betragen und die IP-Kalibrierung sollte auf zwei Sterndelta eingestellt sein. Messen Sie die Länge der montierten Mesenterialarterie mit dem Mikroskop-Okular, wenn sich die Haarlinien über den Außen- und Neuronen des Gefäßsegments befinden. Nach der Normalisierung werden die Gefäße reaktiviert, indem ein Standardstart durchgeführt wird, der aus einer Reihe von Stimulationen und Auswaschperioden besteht.

Setzen Sie zunächst die Abdeckung der Myokammer wieder auf und beginnen Sie mit der Belüftung mit 95 % Luft und 5 % Kohlendioxid. Füllen Sie die Kammer mit frischem PSS, das 100 mikromolare Ascorbinsäure enthält. Ziehen Sie das Gefäß fünf Minuten lang mit fünf mikromolaren Fencheln, Rine oder PE zusammen und waschen Sie es viermal mit PSS-Puffer. Füllen Sie nach dem letzten Waschen die Kammer wieder mit PSS und warten Sie drei Minuten, bevor Sie die Kammer wieder mit PSS füllen und sich mit PE.As zusammenziehen, wie zuvor gezeigt, die Arterie ist nun bereit für das Experiment.

Messen Sie die Entspannung der kontrahierten Gefäße, indem Sie kumulative zunehmende Konzentrationen von Calciumchlorid hinzufügen. Diese Tabelle zeigt, dass die Basalspannungen nach der Gabe von Phenylephrin zwischen Wistar DS oder Doll Salt Sensitive und DR oder Doll Salt Resistant Ratten variierten. Diese Spur von einer Wistar-Ratte zeigt eine Entspannung der PE-kontrahierten Arterien durch kumulative Zusätze von Calciumrelaxation mit stark beeinträchtigten Geweben von DS-Ratten im Vergleich zu Wistar-Ratten und im Vergleich zu Dr.Rats Wie hier zu sehen, können die Unterschiede in der Calciumsensitivität in den Calciumreaktionskurven und erneut bei der Berechnung der EC 50-Werte gesehen werden.

Schließlich zeigen DS-Ratten eine Verringerung der Expression des Calcium-Sensing-Rezeptors in den Arterien im Vergleich zu Dr.Rats Once Mastered. Diese Technik kann in zwei Stunden durchgeführt werden, wenn sie richtig ausgeführt wird. Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie man die vaskuläre Reaktivität von kleinen me-enterischen Attri mit exogenen Verbindungen unter isometrischen Bedingungen vergleichen kann.