Name: A. mesenterica Kontraktion und Entspannung Studies Verwendung automatisierter Draht Myographie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-09-22T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 51 s
Description: Lernen Sie die automatisierte Drahtmyographie zur Messung von Kraft in isolierten mesenterialen Arterien. Diese Methode ermöglicht präzise Untersuchungen der vaskulären Reaktivität bei Phenylephrin und Calcium.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Das beschriebene Projekt wurde von Preis Numbers R01 HL064761, R25 HL059868, 1SC1 HL099139 und P20 MD000175 Form National Institutes of Health unterstützt. Der Inhalt ist ausschließlich in der Verantwortung der Autoren und stellen nicht notwendigerweise die offizielle Meinung der National Institutes of Health.

1. Isolierung von Ratten mesenterialen kleinen Arterie <ol><li> Anesthetize Tier mit Isofluran in einer geschlossenen Kammer, und wischen Sie den Bauch mit Alkohol. </li><li> Führen Sie eine mid-line Laparotomie zu mesenterialen Bett aussetzen. </li><li> Mit einer Schere entfernen ca. 85 cm des Darms mit der Fütterung Gefäßsystem mit der A. mesenterica superior. Schneiden Sie das proximale Ende der Darmabschnitt in der Nähe des Pylorus und das distale Ende in der Nähe des ileo-coecal Kreuzung. Segmente des Darms von Ratten, die tief mit Isofluran und eingeschläfert durch offenen Brustkorb Herzpunktion isoliert sind. </li><li> Platziert herausgeschnitten Abschnitt in einer beschichteten Petrischale mit PSS und führen Sie die Dissektion der A. mesenterica bei Raumtemperatur. </li><li> Pin auf der proximalen Ende des Darms auf der rechten Seite und Stift heraus den Rest der intestineina Gegenuhrzeigersinn (ieproximal Ende auf der linken Fütterung Gefäßsystem auf der anderen Seite des Darms). </li><li> Dissect aus der Branche II und III Segmenten zusammen mit einem Stück des proximalen Segments. </li><li> Dissect aus der Vene und die Arterie zu isolieren (mit V-förmigen Verzweigung) und reinigen Sie sie durch das Entfernen der Fett-und Bindegewebe. Vermeiden Sie direkten Kontakt mit der Arterie, indem Sie vorsichtig mit einer Pinzette und Schneiden durch die Membran des Bindegewebes. </li></ol> 2. Montage des Schiffes <ol><li> Schneiden Sie zwei kurze Abschnitte (≈ 4 cm) von einem 40 um Wolfram-freien Edelstahl-Draht, und mit einer feinen Pinzette, stecken Sie ein in das Lumen des jeweiligen Arterie dabei nicht an das Endothel beschädigt. Verwenden Sie die Drahtspitze zum Lumen öffnen, wenn notwendig. Blut strömte aus dem Behälter ist ein gutes Zeichen das Lumen ist eröffnet. </li><li> Füllen Sie den Myographions Kammer mit physiologischer Kochsalzlösung (PSS; mM: 115 NaCl, 4,7 KCl, 1,4 MgSO 4 .7 H 2 O, 5 NaHCO 3, 1,2 K 2 HPO 4, 1,1 Na 2 HPO 4, 1,0 CaCl 2, 20 HEPES und 5 Glucose, pH 7,4) mit Ascorbinsäure (100 uM) bei 37 ° C und mit einer Pinzette vorsichtig übertragen threaded Gefäßsegment aus der Petrischale in die Kammer bei Raumtemperatur und übertragen Sie die herausgeschnittenen proximalen Gefäßabschnitt der Myographions Kammer und ziehen Sie den Ende entlang des Drahtes, um es in das Gefäß zu ernähren. Vermeiden Sie Strecken des Schiffes. </li><li> Sichern Sie das nahe Ende des Drahtes unter dem in der Nähe Befestigungsschraube auf der rechten Unterkiefer verbunden bis in den Mikrometerbereich gegen den Uhrzeigersinn. Fangen Sie das freie Ende des Drahtes mit einer Pinzette und sichern Sie es unter dem weit Befestigungsschraube auf der rechten Unterkiefer im Uhrzeigersinn. Stellen Sie sicher, dass das Schiff Segment entlang des Drahtes in die Lücke zwischen den Backen ist ohne jeden Kontakt mit dem Kiefer selbst entfernt. </li><li> Schrauben Sie die Kiefer auseinander und richten Sie den zweiten Draht parallel mit dem Schiff und setzen Sie sie in das Ende des Lumen. Vorsichtig den Draht durch das Lumen des Gefäßes Segment in einer Bewegung über die bereits montierte Kabel als Leitfaden. Halten Sie den Draht ca. 1 cm aus dem Behälter zu vermeiden, Stretching es während des Manövers, und berühren Sie das Endothel. </li><li> Schrauben Sie die Kiefer zusammen und gewährleisten, dass die zweite Montage Draht bewegt sich unterhalb des ersten auf der rechten Unterkiefer befestigt. </li><li> Sichern Sie das nahe Ende des zweiten Drahtes im Uhrzeigersinn unter dem in der Nähe Befestigungsschraube des linken Unterkiefers mit dem Wandler. </li><li> Sichern Sie das andere Ende des Drahtes unter die Befestigungsschraube auf der linken Backe, und ziehen Sie den Draht zu strecken. </li><li> Nach Montage abgeschlossen ist, setzen Sie den Motor in der "Montage-Menü" und starten Sie die Normalisierung des Schiffes. </li></ol> 3. Normalisierung Das Auto Dual Wire Myographions System-510A verfügt über eine automatische Normalisierung Funktion, die von der "Normalisierung" Menü beurteilt wird und ermöglicht das Schiff zu einem normalisierten Innenumfang nach einem standardisierten Verfahren werden nach dem Protokoll des Herstellers gestreckt nach Äquilibrierung für 30 min bei 37 ° C. Eine exponentielle Kurve wird dann an den Innenumfang Druckdaten ausgestattet. Das Verfahren legt die Lumendurchmesser (d 100), dass die Arterie würde in vivo gehabt haben, wenn entspannt und unter einem transmuralen Druck von 100 mmHg 1 Die Normalisierung Parameter für Ratten A. mesenterica sind wie folgt.: <ol><li> Ziel transmuralen Druck = 13,3 kPa (100 mm Hg). </li><li> Time = 60 sec, Dauer der einzelnen Schritte der Normalisierung. </li><li> IC 1 / IC 100 = 0,9 (IC 1 = normalisierte Innenumfang, IC 100 = Innenumfang entsprechende Soll-Druck. </li><li> Okular-Kalibrierung 2 * Δ (mm / Okular Division), 2-Delta ist für die Programmierung von Gründen. </li></ol> Messen Sie die Länge der montierten Mesenterialarterie unter dem Mikroskop Okular Lesungen, wenn die Haarlinien über die Nähe und Ferne Enden der montierten Behälter Segm sindENT. Kurz gesagt, ist die Länge der montierten Gefäßsegment bei maximaler Vergrößerung mit einem geeichten Okular Okular in den Dissektionsmikroskop gemessen. Das Okular Lesung mit Haar-line über das Ende des Segments (a 1) und das nahe Ende des Segments (a 2) in okulären Divisionen sind gemessen und aufgezeichnet. Diese Werte, mit der Mikrometer-Lesungen, werden vor und nach dem Dehnen des Schiffes erfasst und in den Menüs für das Programm, um die angepasste Kurve und der Innendurchmesser entsprechend dem Ziel transmuralen Druck von 100 mm Hg berechnet In unseren Untersuchungen wurden die Arterien mit dem Lumen Durchmesser d 1 Satz = 0,9 xd 100, wo aktive Kraftentwicklung maximal ist. Aktive Kraft Entwicklung von ≥ 10 mN in Ratte Mesenterialarterien wird als optimal für Experimente, um fortzufahren. Gewebe mit niedriger aktive Kraft, wurden verworfen. 4. Messung von Reaktionen Nach der Normalisierung sind die mechanischen und funktionellen Eigenschaften der Gefäße, indem Sie eine "Standard-start", die anspruchsvolle Schiffe umfasst mit wiederholten Anwendungen (in der Regel 2 oder 3) von 5 uM Phenylephrin (PE), um reproduzierbare Kontraktionen erhalten wieder aktiviert. Ein typischer "standard start" in unserem Labor besteht aus einer Reihe von Reizen und Auswaschung Perioden wie folgt: <ol><li> Ersetzen Myographions Kammerdeckel und starten Belüftung mit 95% Luft und 5% CO 2. </li><li> Kammer füllen mit frischem PSS (mit 100 uM Ascorbinsäure) </li><li> Contract Schiff mit 5 uM PE für 5 min und 4 x waschen mit PSS-Puffer. </li><li> Nach der letzten Waschung, Nachfüll-Kammer mit PSS und warten Sie 3 Minuten vor dem Wiederholen der Schritte (ii) und (iii). </li></ol> Nach der Standard-Start wird die Arterie bereit für das Experiment. Eine Lockerung der kontrahierten Schiffe werden durch kumulative Zugabe von steigenden Konzentrationen von CaCl 2 (- 4 mM 0,5) bewertet. Als Inhibitoren werden verwendet, Schiffe werden mit den Verbindungen in die Myographions Kammer für 20 min und präsentieren während des Assays vorinkubiert. 5. Data Analysis Die "Normalisierung" Daten für Schiffe und Kraft Kurven direkt in Text umgewandelt, wurden mit dem SigmaPlot 11,0 Grafik-Programm (Systat Software, Point Richmond, CA) analysiert und dargestellt, wie in Abbildung 1 dargestellt. Konzentrations-Wirkungs-Daten aus den Kurven berechnet wurden durch die Bestimmung EC 50-Werte aus den experimentellen Daten angepasst, um ein Vier-Parameter logistische Funktion in der Pharmakologie-Menü des Programms analysiert. Vergleiche zwischen den Gruppen und innerhalb der Gruppen wurden von One Way Analysis of Variance (ANOVA) und Unterschiede mit p &lt;0,05 werden als signifikant durchgeführt. 6. Repräsentative Ergebnisse: <table border="1"><tbody><tr><th> Parameters </th><th> Wistar </th><th> Dahl Salz-Sensitive </th><th> Dahl Salz-Resistant </th></tr><tr><td> L 100 (um) </td><td> 83,26 ± 2,33 </td><td> 91,52 ± 4,67 </td><td> 117,45 ± 8,43 * </td></tr><tr><td> X 1 </td><td> 604,21 ± 41,97 </td><td> 752,24 ± 85,25 </td><td> 745,84 ± 110,09 </td></tr><tr><td> r 2 </td><td> 0,99 ± 0,003 </td><td> 0,97 ± 0,008 </td><td> 0,97 ± 0,007 </td></tr></tbody></table> * Der Unterschied zwischen L 100 Werte für Wistar und DR sind statistisch signifikant. Shapiro-Wilk Test auf Normalverteilung bestanden (p = 0,588); gleiche Varianz Test bestanden (p = 0,237). L 100 = Innendurchmesser des montierten Segment entsprechend dem angestrebten transmuralen Druck. X 1 = Die Mikro-Stellungsregler Einstellung erforderlich, um die Montage Schiffes, seine normalisiert Innenumfang (dh der Wert der Mikrometer-Lesung in denen Versuche durchgeführt wurden) zu dehnen. r 2 = Regressionskoeffizient für Sitz (X i, Y i) zu einer exponentiellen Kurve. NB: Die genaue Vorgehensweise ist im Handbuch für den 510A Myographions System 6 beschrieben. Tabelle 1. Beispiel Read-Out der Normalisierung Parameter für Mesenterialarterie Segmente aus Wistar, DS und DZ ab Basic-Programm in der "Normalisierung Menu" gezeigt. Die Werte sind Mittelwerte (± SEM) von 5 Tieren. * Die Unterschiede zwischen L 100 Werte für Wistar und DS sind statistisch signifikant (p &lt;0,05). <table border="1"><tbody><tr><th> Wistar </th><th> DS </th><th> DR </th></tr><tr><td> 14,2 ± 0,6 </td><td><td> 20,9 ± 1,3 * </td></td></tr></tbody></table> Tabelle 2. Entwickelt Spannungen (mN) in mesenterialen Arterien von Wistar, DS-und DR-Ratten isoliert, folgende Anwendungen von 5 uM PE in jedes Gefäß. Angegebenen Werte sind Mittel (± SEM) von 6-8 Tieren. * Signifikant verschieden von Wistar Kontrollen (p &lt;0,05). <img alt="Abbildung 1" src="/files/ftp_upload/3119/3119fig1.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 1"> Abbildung 1. Ca 2 + e-induzierte Relaxation von PE-Vertrag A. mesenterica aus einer Wistar-Ratte montiert in einem Draht Myographions in physiologischer Kochsalzlösung mit 1 mM Ca 2 +. Die Arterie wurde equilibriert für 30 min bei 37 ° C mit konstanter Belüftung und Antworten auf Ca 2 + e bestimmt. Eine repräsentative Kraft Tracing bei Zugabe von 5 uM PE durch kumulative Zugabe von Ca 2 + gefolgt wird angezeigt. <img alt="Abbildung 2" src="/files/ftp_upload/3119/3119fig2.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 2"> Abbildung 2. Ca 2 + e-induzierte Relaxation von PE-Vertrag A. mesenterica aus einer DS Ratte montiert in einem Draht Myographions in physiologischer Kochsalzlösung mit 1 mM Ca 2 +. Die Arterie wurde equilibriert für 30 min bei 37 ° C mit konstanter Belüftung und Antworten auf Ca 2 + e bestimmt. Eine repräsentative Kraft Tracing bei Zugabe von 5 uM PE durch kumulative Zugabe von Ca 2 + gefolgt wird angezeigt. Ca 2 + Entspannung war schwer in diesem Gewebe im Vergleich zu denen von Wistar-und DR-Ratten beeinträchtigt. <img alt="Abbildung 3" src="/files/ftp_upload/3119/3119fig3.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 3"> Abbildung 3. Ca 2 + e-induzierte Relaxation von PE-Vertrag A. mesenterica aus einer DR Ratte montiert in einem Draht Myographions in physiologischer Kochsalzlösung mit 1 mM Ca 2 +. Die Arterie wurde equilibriert für 30 min bei 37 ° C mit konstanter Belüftung und Antworten auf Ca 2 + e determined.A Vertreter Kraft Tracing bei Zugabe von 5 uM PE durch kumulative Zugabe von Ca 2 + gefolgt wird angezeigt. <img alt="Abbildung 4" src="/files/ftp_upload/3119/3119fig4.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Abbildung 4"> Abbildung 4. A. [Ca 2 +] e-Wirkungs-Kurven. B. Balkendiagramm mit EC 50-Werte für Entspannung durch Anpassen der Daten an ein Vier-Parameter logistische curve.C.CaR Ausdruck in mesenterialen Arkaden von DR und DS Ratten isoliert bestimmt.

<ol><li>Mulvany, M. J., Halpern, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+properties+of+vascular+smooth+muscle+cells+in+situ%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Mechanical properties of vascular smooth muscle cells in situ.</a> Nature. 260, 617-619 (1976).</li>
<li>Bevan, J. A., Osher, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+direct+method+for+recording+tension+changes+in+the+wall+of+small+blood+vessels+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Agents+Actions%22%5BJournal%5D)">A direct method for recording tension changes in the wall of small blood vessels in vitro.</a> Agents Actions. 2, 257-260 (1972).</li>
<li>Mulvany, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Procedures+for+investigating+of+small+vessels+using+small+vessel+myograph%5BTitle%5D)+AND+%22DMT+Danish+Myo+Technology%22%5BJournal%5D)">Procedures for investigating of small vessels using small vessel myograph.</a> DMT Danish Myo Technology. , (2004).</li>
<li>Angus, J. A., Wright, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Techniques+to+study+the+pharmacodynamics+of+isolated+large+and+small+blood+vessels%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pharmacol.+Toxicol.+Methods%22%5BJournal%5D)">Techniques to study the pharmacodynamics of isolated large and small blood vessels.</a> J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 44, 395-407 (2000).</li>
<li>Halpern, W., Mulvany, M. J., Warshaw, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+properties+of+smooth+muscle+cells+in+the+walls+of+arterial+resistance+vessels%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Mechanical properties of smooth muscle cells in the walls of arterial resistance vessels.</a> J. Physiol. 275, 85-101 (1978).</li>
<li>Lindhorst, J., Alexander, N., Blignaut, J., Rayner, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differences+in+hypertension+between+blacks+and+whites%3A+an+overview%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc.+J.+Afr%22%5BJournal%5D)">Differences in hypertension between blacks and whites: an overview.</a> Cardiovasc. J. Afr. 18, 241-247 (2007).</li>
<li>Eley, S. L., Allen, C. M., Williams, C. L., Bukosi, R. D., Pointer, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Action+of+thiazide+on+renal+interstitial+calcium%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Hypertens%22%5BJournal%5D)">Action of thiazide on renal interstitial calcium.</a> Am. J. Hypertens. 21, 814-819 (2008).</li>
<li>Palmer, C. E., Rudd, M. A., Bujoski, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Renal+interstitial+Ca2%2B+during+sodium+loading+of+normotensive+and+Dal-salt+hypertensive+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Hypertens%22%5BJournal%5D)">Renal interstitial Ca2+ during sodium loading of normotensive and Dal-salt hypertensive rats.</a> Am. J. Hypertens. 16, 771-776 (2003).</li>
<li>Hurwitz, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Homeostatic+control+of+plasma+calcium+concentration%5BTitle%5D)+AND+%22Crit.+Rev.+Biochem.+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Homeostatic control of plasma calcium concentration.</a> Crit. Rev. Biochem. Mol. Biol. 31, 41-100 (1996).</li>
<li>Brown, E. M., MacLeod, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+sensing+and+extracellular+calcium+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Extracellular sensing and extracellular calcium signaling.</a> Physiol. Rev. 81, 239-297 (2001).</li>
<li>Breitwieser, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+calcium+as+an+integrator+of+tissue+function%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Biochem.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Extracellular calcium as an integrator of tissue function.</a> Int. J. Biochem. Cell Biol. 40, 1467-1480 (2008).</li>
<li>Mupanomunda, M. M., Wang, Y., Bukoski, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+chronic+sensory+denervation+on+Ca2%2B-induced+relaxation+of+isolated+mesenteric+resistance+arteries%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Effect of chronic sensory denervation on Ca2+-induced relaxation of isolated mesenteric resistance arteries.</a> Am. J. Physiol. 274, 1655-1661 (1998).</li>
<li>Mupanomunda, M. M., Ishioka, N., Bukoski, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interstitial+Ca2%2B+undergoes+dynamic+changes+sufficient+to+stimulate+nerve-dependent+Ca2%2B-induced+relaxation%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Interstitial Ca2+ undergoes dynamic changes sufficient to stimulate nerve-dependent Ca2+-induced relaxation.</a> Am. J. Physiol. 276, 1035-1042 (1999).</li>
<li>Mupanomunda, M. M., Tian, B., Ishioka, N., Bukoski, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Renal+interstitial+Ca2%2B%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Renal+Physiol%22%5BJournal%5D)">Renal interstitial Ca2+.</a> Am. J. Physiol. Renal Physiol. 278, F644-F649 (2000).</li>
<li>Awumey, E. M., Hill, S. K., Diz, D. I., Bukoski, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytochrome+P-450+metabolites+of+2-arachidonoylglycerol+play+a+role+in+Ca2%2B-induced+relaxation+of+rat+mesenteric+arteries%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Cytochrome P-450 metabolites of 2-arachidonoylglycerol play a role in Ca2+-induced relaxation of rat mesenteric arteries.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 294, 2363-2370 (2008).</li>
<li>Chen, W., Bergsman, J. B., Wang, X., Gilkey, G., Pierpoint, C. R., Daniel, E. A., Awumey, E. M., Dauban, P., Dodd, R. H., Ruat, M., Smith, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Presynaptic+external+calcium+signaling+involves+the+calcium-sensing+receptor+in+neocortical+nerve+terminals%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Presynaptic external calcium signaling involves the calcium-sensing receptor in neocortical nerve terminals.</a> PloS One. 5, e8563-e8563 (2010).</li>
<li>Bukoski, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+perivascular+sensory+nerve+Ca2%2B+receptor+and+blood+pressure+regulation%3A+a+hypothesis%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Hypertens%22%5BJournal%5D)">The perivascular sensory nerve Ca2+ receptor and blood pressure regulation: a hypothesis.</a> Am. J. Hypertens. 11, 1117-1123 (1998).</li>
<li>Bukoski, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+Ca2%2B+and+blood+pressure%3A+evidence+that+Ca2%2B-sensing+receptor+activated+sensory+nerve+dilator+activity+couples+changes+in+interstitial+Ca2%2B+with+vascular%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Dietary Ca2+ and blood pressure: evidence that Ca2+-sensing receptor activated sensory nerve dilator activity couples changes in interstitial Ca2+ with vascular.</a> 16, 218-221 (2001).</li>
</ol>

Keine Interessenskonflikte erklärt.

Bluthochdruck ist eine der Hauptursachen für Herz-Kreislauf-, Hirn-und renale Morbidität / Mortalität. Das Auftreten von Bluthochdruck ist hoch in der Bevölkerung und Salz-sensitive Bluthochdruck ist besonders hoch in der Alterung der Bevölkerung, und häufiger in Schwarze als Weiße. Dies ist vermutlich darauf zurückzuführen sein, die Tendenz der Schwarzen zu Natrium in den Nieren 9 behalten. Salz-Sensitivität ist ein wesentlicher Faktor für Nierenerkrankungen und ist mit einer endothelialen Dysfunktion assozi...

<table border="1"><tbody><tr><th> Name des Gerätes / Reagenz </th><th> Firma </th><th> Katalog-Nummer </th><th> Kommentare (optional) </th></tr><tr><td> Auto Dual Wire Myographions System-510A DMT-USA, Inc. </td><td> Atlanta, GA. </td><td> 100151 </td><td></td></tr><tr><td> PowerLab/4SP Data Acquisition System </td><td> ADInstruments, Colorado Springs, CO </td><td> ML750 </td><td> Neue Modelle mit 4-16 Eingangskanäle zur Verfügung. </td></tr><tr><td> Dell Dimension XPS Gen 4 Computer </td><td> Dell </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Stemi SV II (Apo) Präparation Mikroskop mit Ocular </td><td> Carl Zeiss International. </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Wistar, Dahl Salz-und Kleinschreibung, Dahl Salz-resistenten Ratten </td><td> Harlan Sprague Dawley, Indianapolis, IN. </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Rodent Chow </td><td> Harland Tekland, Madison, WI. </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Phenylephrin </td><td> Sigma-Aldrich, St. Louis, MO. </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Andere Chemikalien </td><td></td><td></td><td> Alle verwendeten Chemikalien wurden von den reinsten Sorten im Handel erhältlich. </td></tr></tbody></table>

a. mesenterica kontraktion und entspannung studies verwendung automatisierter draht myographie

Mesenteric Artery Contraction and Relaxation Studies Using Automated Wire Myography

Proximal Widerstand Schiffe, wie die Arteria mesenterica, tragen wesentlich zu den peripheren Widerstand. Diese kleinen Schiffe zwischen 100-400 um Durchmesser Funktion in erster Linie bei der Leitung der Blutfluss zu den verschiedenen Organen nach den allgemeinen Vorschriften des Körpers. Die Ratte A. mesenterica hat einen Durchmesser von mehr als 100 um. Die Myographie Technik, die zuerst von Mulvay und Halpern 1 beschrieben, wurde die Methode durch Bevan und Osher 2 vorgeschlagen basiert. Die Technik bietet Informationen über kleine Gefäße unter isometrischen Bedingungen, in denen wesentliche Verkürzung der Muskel-Präparat wird verhindert. Da die Kraft der Produktion und der Empfindlichkeit der Gefäße auf verschiedene Agonisten ist abhängig vom Ausmaß der Dehnung, nach aktive Spannung Länge Zusammenhang ist es wichtig, zu einer Kontraktion Studien unter isometrischen Bedingungen durchzuführen, um die Einhaltung der Montage Drähte zu verhindern. Edelstahl Drähte sind mit Wolfram-Drähten aufgrund der Oxidation des letzteren, die aufgezeichneten Antworten 3 betrifft bevorzugt. Die Technik ermöglicht den Vergleich der Agonisten-induzierten Kontraktionen montiert Schiffe, Beweise für die normale Funktion der glatten Gefäßmuskelzellen Rezeptoren zu erhalten. Wir haben in mehreren Studien gezeigt, dass isolierte mesenterialen Arterien, die mit phenylyephrine zusammengezogen sind bei der Zugabe von kumulativen Konzentrationen von extrazellulärem Calcium (Ca 2 + e) zu entspannen. Die Ergebnisse führten uns zu, dass perivaskulären sensorischen Nerven, die die G-Protein-gekoppelten Ca 2 +-Sensing-Rezeptor (CAR) zum Ausdruck zu schließen, vermitteln diese Vasorelaxation Antwort. Mit einer automatisierten Draht Myographie Methode zeigen wir hier, dass Mesenterialarterien von Wistar, Dahl Salz-und Kleinschreibung (DS) und Dahl salzresistente (DR) Ratten reagieren unterschiedlich auf die Ca 2 + e. Gewebe von Wistar-Ratten zeigten höhere Ca 2 +-Sensitivität im Vergleich zu denen von DR und DS. Reduzierte CaR Ausdruck in Mesenterialarterien von DS Ratten korreliert mit reduzierten Ca 2 + e-induzierte Relaxation von isolierten, pre-Vertrag Arterien. Die Daten deuten darauf hin, dass das Auto für Entspannung Mesenterialarterien unter erhöhtem adrenerge Ton erforderlich ist, wie es bei Bluthochdruck und zeigen einen angeborenen Defekt in der Car-Signalweg in Dahl Tiere, die viel schwerer in DS ist. Die Methode ist hilfreich bei der Bestimmung Gefäßreaktivität ex vivo in mesenterialen Widerstand Arterien und ähnliche kleine Blutgefäße und Vergleiche zwischen verschiedenen Agonisten und / oder Antagonisten können einfach und konsistent bewertet werden Side-by-side 6,7,8.

Eine automatisierte Myographie Methode zur Kraftmessung in isolierten mesenterialen Arterien beschrieben. Es beschäftigt Mulvany-Halpern Auto Dual Wire Myographions 510A, um Antworten auf Phenylephrin und extrazelluläres Calcium zu bestimmen. Die Methode ermöglicht eine konsistente Bestimmung der isometrischen Antworten auf Agonisten in kleinen Gefäßen mit einem Durchmesser von 60 bis 300 um, unabhängig.

A. mesenterica Kontraktion und Entspannung Studies Verwendung automatisierter Draht Myographie

proximale Widerstandsgefäße, wie beispielsweise die Mesenterialarterien, tragen wesentlich zum peripheren Widerstand bei. Diese kleinen Gefäße mit einem Durchmesser zwischen ...

Dieses Verfahren verwendet salzempfindliche und salzresistente Ratten, um die Reaktivität der mesenterialen Widerstandsarterien unter Phenylephrin-induzierter Spannung gegenüber extrazellulärem Kalzium zu vergleichen. Dies wird erreicht, indem zunächst die mesenteriale Arkade von den Tieren isoliert und die Widerstandsarterienäste präpariert werden. Anschließend wird ein erster von zwei Edelstahldrähten durch ein kurzes Segment der präparierten Arterie geführt, und das Gefäß wird in die Myographenkammer montiert.Dann wird der zweite Edelstahldraht parallel zum ersten Draht durch das Lumens des Gefäßes geführt. Anschließend wird das befestigte Gefäß auf einen normalisierten inneren Umfang gedehnt. Der letzte Schritt des Verfahrens besteht darin, das Gefäß erneut zu aktivieren, indem es wiederholt mit Phenylephrin herausgefordert und anschließend mit aufsteigenden Gaben von Calcium entspannt wird.Letztlich zeigen die Ergebnisse Veränderungen der Spannung im Gefäß, die in eine Kalzium-Antwortkurve umgewandelt und zur Bestimmung der EC 50-Werte verwendet werden können. Zum Vergleich. Uns kam die Idee, diese Methode anzuwenden, als wir entdeckten, dass das Nev-Netzwerk von Ratten-Masona

mesenteric-artery-contraction-relaxation-studies-using-automated-wire

Research

Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

Messungen der KV7 (KCNQ) Kaliumkanal-Aktivität in isolierten arteriellen Myozyten (mit Patch-Clamp-elektrophysiologischen Techniken) parallel mit Messungen constrictor / Dilatator Antworten (mit Druck Myographie) können wichtige Informationen über die Rolle von KV7 Kanäle in vaskulären glatten Muskelzellen Physiologie offenbaren und Pharmakologie.

Exploring arteriellen glatten Muskelzellen KV7 Kalium Kanal Funktion mit Patch-Clamp-Elektrophysiologie und Druck Myographie

In Druck Myographie, wird ein intaktes kleines Segment von einem Schiff auf zwei kleine Kanülen angebracht und unter Druck gesetzt, um eine geeignete luminalen Druck. Hier beschreiben wir die Methode Vasorelaxation Reaktion der Maus 3...

Beurteilung Murine Widerstand Artery Funktion Mit Druck Myographie

Druck Myographie wird verwendet, um Vasoaktivität der kleinen Arterien, die anhaltende Verengung zu entwickeln, wenn unter Druck zu bewerten. Diese Handschrift ein detailliertes Protokoll, um in isolierten Segmenten der kleinen Mesenterialarterien von Ratten, Vasoaktivität und die Wirkung der intraluminale Druck auf die Gefäßdurchmesser zu bewerten.

Beurteilung Myogenic Antwort und Vasoaktivität In Resistance Mesenterialarterien Mit Druck Myographie

Dieses Manuskript beschreibt in Vitro Videomikroskopie Protokolle für die Bewertung der Gefäßfunktion in Ratte zerebralen Widerstand Arterien. Das Manuskript beschreibt auch Techniken für die Bewertung der kapilläre Dichte mit Gewebekulturen beschrifteten Lektine und Gewebe Perfusion mit Laser-Doppler-Flowmetry.

Bewertung der vaskulären Kontrollmechanismen Nutzung Videomikroskopie der isolierten Widerstand Arterien von Ratten

Myograph Leitertechnik dient zur vaskulären glatten Muskelzellen Funktionen und Bildschirm neue Drogen zu untersuchen. Wir berichten über ein detailliertes Protokoll zur Messung der isometrischen Kontraktilität der Maus mesenterialen Arterie und für das screening von neuen Muskelrelaxantien von vaskulären glatten Muskelzellen.

Messung der isometrischen Kontraktilität der Maus mesenterialen Arterie mit Draht Myographie

Das Protokoll beschreibt die Verwendung von Drahtsynografie zur Bewertung der transmural isometrischen Spannung von mesenterischen Arterien, die von Mäusen isoliert sind, unter besonderer Berücksichtigung der Modulation durch Faktoren, die aus Endothelzellen und perivaskulären Fettgewebe freigesetzt werden.

Bewertung der Reaktion der Gefäß-Tone mit isolierten mesenterischen Arterien mit einem Schwerpunkt auf der Modulation durch Perivascular Adipose Tissues

Das vorliegende Protokoll beschreibt die Konzepte und die technische Anwendung der tensometrischen Myographentechnik unter Verwendung eines Mehrkammer-Myographensystems bei der experimentellen ex vivo Bewertung der Aortenendothelfunktion der Maus.

Messung der endothelabhängigen Vasorelaxation in der thorakalen Aorta der Maus mittels tensometrischer Kleinvolumenkammermyographie

Der Dünndarm wird häufig Giftstoffe, die den Blutfluss zu beeinflussen, und kann sich negativ auf die Nährstoffabsorption ausgesetzt. Mit Hilfe eines multimyograph und A. und V. mesenterica isoliert, Verbindungen oder Giftstoffe von Interesse für Vasoaktivität abgeschirmt werden.

Isolierung und Verwendung von Rinder Abschnitte A. und V. mesenterica als Bioassay für Vasoaktivität im Dünndarm Testen

Wir beschreiben eine chirurgische Technik, die eine Drahtverletzung in der Oberschenkelarterie von Mäusen hervorruft, um eine neointimale Hyperplasie zu induzieren, die als Modelltestsystem für die perivaskuläre Verabreichung von therapeutischen Wirkstoffen zur Hemmung der Restenose dient.

Mausmodell der Femoralarterie Draht Verletzung mit Implantation einer Perivaskuläre Drug Delivery-Patch

Die Maus Femoralarterie Drahtverletzungsmodell der Restenose ist technisch anspruchsvoll. In diesem Protokoll zeigen wir die wichtigsten technischen Details unerlässlich für die erfolgreiche Durchführung von Draht Verletzung konsequente Neointima für Studien der Restenose zu induzieren.

Ein Mausmodell von arterieller Restenose: Technische Aspekte der Femoral Draht Injury

Lernen Sie die automatisierte Drahtmyographie zur Messung von Kraft in isolierten mesenterialen Arterien. Diese Methode ermöglicht präzise Untersuchungen der vaskulären Reaktivität bei Phenylephrin und Calcium.

A. mesenterica Kontraktion und Entspannung Studies Verwendung automatisierter Draht Myographie

Weitere Videos entdecken