Ein nicht-invasiver Ansatz zur Untersuchung der Elektrophysiologie von Motoneuronen in Zebrafischembryonen
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Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 5:10 Min. • July 8th, 2025
Legen Sie gentechnisch veränderte Zebrafischembryonen unter ein Stereomikroskop und beobachten Sie die spontane Schwanzspirale, die von den Motoneuronen des Rückenmarks ausgelöst wird.
Die intrinsischen Eigenschaften dieser Neuronen bewirken einen Ioneneinstrom durch Natriumkanäle, was zu einer spontanen Membrandepolarisation und der Erzeugung von Aktionspotentialen führt, die sich auf die Muskeln ausbreiten und das Schwanzwickeln auslösen. Messen Sie die Wickelfrequenz.
Übertragen Sie einige Embryonen auf einen Natriumkanalblocker, um den Natriumeinstrom zu hemmen und die reduzierte Spiralfrequenz zu beurteilen.
Montieren Sie unbehandelte Embryonen in geschmolzene Agarose, lassen Sie Agarose erstarren, um die Bewegung einzuschränken, und beobachten Sie sie unter einem Fluoreszenzmikroskop.
Die Motoneuronen exprimieren einen Biosensor mit einer membrangebundenen Spannungsmessdomäne (VSD), die mit Donor- und Akzeptorfluorophoren fusioniert ist.
Die Depolarisation verändert die VSD-Konformation und bringt die Fluorophore näher zusammen.
Bei der Anregung überträgt der Donor Energie auf den Akzeptor, was zu einer Fluoreszenzemission des Akzeptors führt.
Fügen Sie den Blocker hinzu, um
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