Gleichzeitige optische und elektrophysiologische Überwachung von neuronalen Zellen in Hirnschnitten

Beginnen Sie mit der Perfusionsperfusion einer belüfteten künstlichen Zerebrospinalflüssigkeit (aCSF) über einem Netzgitter

.

Übertragen Sie eine Gehirnscheibe mit fluoreszierenden Protein-exprimierenden Neuronen und verankern Sie sie mit einem platinverdrahteten Gerät.

Drehen Sie das Netzgitter für die Ausrichtung.

Senken Sie die Mehrkanalsonde in Richtung der Scheibe ab.

Passen Sie den Filterwürfel für die Visualisierung fluoreszierender Proteine an.

Drehen Sie die Scheibe, um die Sonde auszurichten.

Stellen Sie die Sondenhöhe unterhalb der Gewebeoberfläche ein.

Perfusionieren Sie nun den aCSF und konzentrieren Sie sich auf die fluoreszenzmarkierten Neuronen.

Fokussieren Sie sich mit einem Hochleistungsobjektiv auf das Gewebe und stellen Sie das Anregungslicht ein.

Verwenden Sie einen geeigneten Lichtfilter, um die Fluoreszenz in Neuronen zu beobachten.

Stellen Sie die Objektivlinse so ein, dass Platz für die Patch-Pipette bleibt, und üben Sie positiven Druck aus.

Positionieren Sie als Nächstes die Pipette in der Nähe des Neurons, um ein Membrangrübchen zu bilden.

Wenden Sie schließlich einen schwachen Sog an, um eine Membrandichtung zu erzeugen, gefolgt von einem starken Sog, um