Gleichzeitige elektroenzephalographische und lokale Feldpotentialaufzeichnungen bei einer anästhesierten Ratte

Befestigen Sie eine anästhesierte Ratte mit freiliegendem Schädel an einem stereotaktischen Rahmen.

Die Ratte hat ein Bohrloch im Schädel, in das die Dura durchstochen ist, einen Schnitt am Hals und Stimulationselektroden, die an ihren Schnurrhaarpolstern befestigt sind.

Befestigen Sie eine mit leitfähiger Paste verschmierte Spinnenelektrode (EEG) auf dem Schädel und halten Sie das Bohrloch frei.

Die Spinnenelektrode misst das Oberflächen-EEG und spiegelt die gesamte neuronale Aktivität des kortikalen Bereichs darunter wider.

Montieren Sie eine lineare Mehrkanal-Mikroelektrode auf einem Mikromanipulator.

Führen Sie die Mikroelektrode durch das Bohrloch bis zu einer Tiefe von 1500 Mikrometern in die Großhirnrinde ein.

Die Mikroelektrode misst das lokale Feldpotential (LFP), das die kortikale neuronale Aktivität widerspiegelt.

Platzieren Sie die EEG- und LFP-Referenzelektroden innerhalb des Halsschnittes.

Schließen Sie die Aufzeichnungs- und Referenzelektroden an einen Vorverstärker an, der mit einer Datenerfassungseinheit verbunden ist.

Wenden Sie elektrische Stimuli auf die Whisker-Pads an und stellen Sie die Mikroelektrodentiefe ein, um die evozierte LFP-Amplitude zu maximieren. Zeichnen Sie die co-lokalisierten EEG- und LFP-Signale auf.

Reinigen und trocknen Sie bei diesem Verfahren den Schädel, der das Bohrloch umgibt, mit einem Wattestäbchen. Tragen Sie die leitfähige EEG-Paste vorsichtig auf eine flache Seite einer EEG-Spinnenelektrode auf. Lassen Sie ein kleines Loch frei von EEG-Paste auf der Spinnenelektrode, damit eine multilaminare Mikroelektrode durch das Loch gelangen kann, ohne die Paste und die Spinnenelektrode zu berühren.

Richten Sie die Spinnenelektrode mit dem Bohrloch im Schädel aus, wobei die EEG-Paste zum Schädel zeigt. Drücken Sie die Spinnenelektrode vorsichtig auf den Schädel und stellen Sie über die EEG-Paste einen festen Kontakt zum Schädel her.

Entfernen Sie die Paste, die das Bohrloch verdeckt, mit einer Nadel auf einer Spritze und entfernen Sie überschüssige EEG-Paste über den Umfang der Spinnenelektrode hinaus, so dass der Kontakt zwischen der Spinnenelektrode und dem Schädel räumlich auf die Größe der Elektrode beschränkt ist. Schmieren Sie dann EEG-Paste auf die Referenzelektrode für das EEG und platzieren Sie sie sicher in der Inzision im Nacken der Ratte.

Verbinden Sie anschließend die EEG-Elektroden über einen passiven Signalsplitter für niederohmige Signale mit dem Vorverstärker. Testen Sie zu diesem Zeitpunkt den Widerstand der EEG-Sonde, um sicherzustellen, dass er unter fünf Kiloohm liegt. Wenn nicht, füge mehr EEG-Paste hinzu und stelle sicher, dass die Spinnenelektrode einen guten Kontakt mit dem Schädel hat.

Montieren Sie anschließend einen Mikromanipulatorarm auf dem stereotaktischen Rahmen. Verbinden Sie eine lineare 16-Kanal-Mikroelektrode mit einem 16-Kanal-Spitzkopftisch, der sicher am Mikromanipulatorarm befestigt ist. Dann schmieren Sie die EEG-Paste auf die Referenzelektrode für die Mikroelektrode und platzieren Sie sie dann sicher in der Inzision neben der Referenzelektrode für das EEG. Stellen Sie den Winkel des Mikromanipulatorarms so ein, dass die Mikroelektrode senkrecht zur kortikalen Oberfläche steht.

Senken Sie nun die Mikroelektrode unter einem Mikroskop so ab, dass die Spitze der Mikroelektrode auf die winzige Öffnung am Boden des Bohrlochs gerichtet ist, bis die oberste Elektrode gerade die kortikale Oberfläche durchdringt. Es muss darauf geachtet werden, dass die Mikroelektrode nicht auf die Oberfläche der Dura gedrückt wird, da dies die Elektrode brechen würde.

Führen Sie die Mikroelektrode in einer Tiefe von 1500 Mikrometern in die kortikale Oberfläche ein. Passen Sie die Tiefe an, indem Sie einen Stimuluszug auf das Whisker-Pad anwenden und den 16-Kanal-evozierten LFP auf einem PC-Monitor beobachten. Drehen Sie vorsichtig den Z-Achsen-Knopf am Mikromanipulator, bis die höchste Amplitude des evozierten LFP auftritt, da diese mit der Schicht 4 im Kortex zusammenfällt.