JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 4:41 Min. • July 8th, 2025
Beginnen Sie mit einem immobilisierten Gehirnschnitt in einer Aufnahmekammer.
Fokussieren Sie mit der kameragesteuerten Software eines Mikroskops auf den Zielbereich
Schalten Sie das Anregungslicht ein und nehmen Sie mehrere Bilder in unterschiedlichen Tiefen auf.
Die Software erkennt die Koordinaten von fluoreszenzmarkierten Zellen.
Positionieren Sie nun die mit Lösung gefüllte Patch-Pipette mit der Aufzeichnungselektrode in der Kammer.
Verwenden Sie eine geeignete Software, um die Positionsregler zu kalibrieren.
Kalibrieren Sie die Regler bei hoher Vergrößerung neu, um die fluoreszenzmarkierte Zelle präzise anzuvisieren.
Wählen Sie die Koordinaten der Zielzelle aus.
Starten Sie das automatische Absenken der Patch-Pipette.
Der Computer überwacht den Widerstand über die Elektrode. Üben Sie einen negativen Druck aus, eine Erhöhung des Widerstands aufgrund des Kontakts der Pipette mit der Zellmembran deutet auf die Bildung von Gigasealen hin.
Anschließend verringert die Software den Druck weiter, um die Zellmembran zu durchstechen und eine Ganzzell-Patch-Konfiguration zu erhalten.
Platzieren Sie in diesem Schritt eine Gehirnscheibe in der Mitte der Aufnahmekammer. Stabilisieren Sie d
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