Aufzeichnung der Aktivität des Nervus mesenterialis afferent in einem ex vivo Jejunumsegment der Maus

Beginnen Sie mit einer Aufnahmekammer, die ein präpariertes Segment eines Mausjejunums, eines Teils des Dünndarms, enthält, das in eine Elektrolytlösung getaucht und mit einer Nadel gesichert wurde.

Das jejunale Segment umfasst das umgebende Fettgewebe mit einem vorpräpräsezierten mesenterialen afferenten Nerv, der Signale vom Jejunum an das Gehirn weiterleitet.

Das Segment wird für den Lösungsfluss mit den Zu- und Abflussöffnungen der Kammer verbunden.

Nehmen Sie eine Saugelektrode, die mit einem Mikromanipulator und einer Aufzeichnungseinheit verbunden ist.

Füllen Sie die Saugelektrode mit der Elektrolytlösung und positionieren Sie sie in der Nähe des Nervus mesenterialis afferentus.

Wenden Sie einen sanften Sog an, um den Nerv mit dem umgebenden Fettgewebe zu einer dichten Abdichtung zu ziehen.

Schließen Sie die Ausströmöffnung unter Beibehaltung des Zuflusses, um den Innendruck und die Dehnung des Jejunalsegments allmählich zu erhöhen.

Dies bewirkt die Erregung des Nervus mesenterialis afferentus um das Jejunum herum und erzeugt ein elektrisches Signal.

Erfassen Sie die Aktivität des afferenten Nervs als Reaktion auf Änderungen des jejunalen Drucks.

Senken Sie bei diesem Verfahren mit einem Mikromanipulator die Spitze der Saugelektrode in das Organbad ab. Saugen Sie dann vorsichtig etwas Krebslösung aus dem Organbad ab, so dass die Spitze der Elektrode in die Krebslösung eingetaucht wird. Stellen Sie sicher, dass die Krebslösung die Drahtelektrode in der Saugelektrode bedeckt.

Positionieren Sie dann die Spitze der Saugelektrode unmittelbar neben dem durchtrennten afferenten Nervenstrang und ziehen Sie den durchtrennten Nervenstrang über seine gesamte Länge in die Kapillare hinein. Manövrieren Sie die Spitze der Elektrode in Richtung des Fettgewebes und saugen Sie sie mit dem Kolben in die Glaskapillare ab, wodurch der Nerv in der Kapillare mechanisch gegen den Inhalt des Organbads abgedichtet wird.

Um die Aufzeichnung der Aktivität des afferenten Nervs zu verifizieren, führen Sie eine durch Rampendehnung induzierte Erhöhung des afferenten Feuerns durch, indem Sie die Ausgangsöffnung schließen, um zu einem allmählichen Druckanstieg im Darmsegment zu führen. Führen Sie das gewünschte Versuchsprotokoll nur durch, wenn drei aufeinanderfolgende Rampendehnungen zu einer reproduzierbaren Entladung mehrerer Einheiten führen.