Visualisierung und Kartierung neuronaler Signalwege in einem Amygdala-Hirnschnitt

Im Gehirn der Maus enthält die Amygdala Neuronen, die synaptische Verbindungen mit dem medialen präfrontalen Kortex oder mPFC-Neuronen bilden.

Nehmen Sie ein Amygdala-Hirnschnitt, in dem die mPFC-Neuronen einen lichtempfindlichen Kanal Rhodopsin exprimieren, das mit einem fluoreszierenden Protein fusioniert ist.

Legen Sie die Scheibe in eine Aufnahmekammer und visualisieren Sie sie unter einem Fluoreszenzmikroskop, um die mPFC-Neuronen zu lokalisieren.

Wechseln Sie in eine Hellfeldansicht und führen Sie eine Patch-Pipette ein, die eine interne Lösung enthält.

Üben Sie positiven Druck aus, um die Pipette in Richtung eines Amygdala-Neurons zu schieben.

Bei neuronalem Kontakt bildet sich ein Grübchen.

Saugen Sie so, um eine dichte Abdichtung zu bilden.

Setzen Sie das Saugen fort, um die Membran zu zerbrechen, und stellen Sie Kontakt mit dem Inneren der Zelle her.

Beleuchten Sie die Schnittscheibe, um das neuronale mPFC-Kanalrhodopsin zu aktivieren, das den positiven Ioneneinstrom, die Erzeugung von Aktionspotentialen und die Freisetzung von Neurotransmittern auslöst.

Die Neurotransmitter binden an postsynaptische Amygdala-Neuronenrezeptoren, was zu einem Ioneneinstrom und einer Strome