Bewertung der Interaktionen zwischen glutamatergen Neuronen und Gliomzellen in einer Co-Kultur

Beginnen Sie mit einem lamininbeschichteten, kompartimentierten mikrofluidischen Gerät, das über einem gemusterten Multielektrodenarray (MEA) positioniert ist.

Das Gerät trägt kultivierte iPSC-abgeleitete kortikale glutamaterge Neuronen, die an Mikroelektroden eines MEA haften.

Diese Neuronen kommunizieren über elektrische Signale. Zeichnen Sie diese Signale als neuronale Grundaktivität auf.

Besiedeln Sie das Gerät anschließend mit glutamatreichen pädiatrischen hochgradigen Gliomzellen, einer Art Hirntumorzelle, und inkubieren Sie.

Im Laufe der Zeit dringen Gliomzellen in den Kanal ein und heften sich an, wodurch die Co-Kultur entsteht. Später setzen Gliomzellen Glutamat frei, einen exzitatorischen Neurotransmitter.

Das freigesetzte Glutamat interagiert mit neuronalen Rezeptoren, was zu einem Einstrom von Kalzium- und Natriumionen führt, der eine Depolarisation der neuronalen Membran verursacht.

Dies induziert die neuronale Erregbarkeit und erhöht die neuronale Aktivität.

Zeichnen Sie die elektrischen Signale erneut auf, und ein signifikanter Anstieg nach der Co-Kultur deutet auf eine erfolgreiche Interaktion zwischen Neuronen und Gliomzellen hin.

Säen Sie die trypsinisierten UW479- und BT35-Zellen auf die reifen adhärenten glutamatergen Neuronen in jedem speziellen mikrofluidischen Gerät. Halten Sie die Co-Kulturen zwei Tage lang in einer kontrollierten Umgebung bei 37 Grad Celsius und 5 % Kohlendioxid mit dem glutamatergen Neuron D11 und weiterem Medium.

Zählen Sie pädiatrische hochgradige Gliomzellen anhand der mikroskopischen Bilder, die mit der Bildanalysesoftware analysiert wurden, um ihre Lebensfähigkeit zu beurteilen, und berechnen Sie den Prozentsatz der Zellen. Setzen Sie das MFD in das Aufzeichnungsgerät ein und verwenden Sie eine handelsübliche Software, um die elektrophysiologische Aufzeichnung von glutamatergen Neuronen am 21. Tag durchzuführen.

Bevor Sie pädiatrische hochgradige Gliomzellen aussäen, führen Sie eine zweite elektrophysiologische Aufzeichnung der differenzierten glutamatergen Neuronen durch, die als Kontrolle kultiviert wurden, parallel zur Co-Kultur.