Modellierung des durch reaktive Sauerstoffspezies induzierten neuronalen Todes in zerebellären Körnerneuronen der Maus

Nehmen Sie eine Kultur von primären Kleinhirn-Körnerneuronen der Maus.

Medien hinzufügen, die Wasserstoffperoxid, eine reaktive Sauerstoffspezies oder ROS enthalten, und kurz inkubieren.

Wasserstoffperoxid diffundiert in die Zellen und wird in hochreaktive freie Radikale umgewandelt.

Diese Radikale induzieren die Lipidperoxidation und beeinträchtigen die Integrität der Zellmembran.

Darüber hinaus verursachen die Radikale oxidative Veränderungen in zellulären Proteinen, die deren Funktion beeinträchtigen.

Darüber hinaus induzieren sie DNA-Brüche, die zu genomischer Instabilität führen.

Die Radikale verursachen auch oxidative Schäden an intrazellulären Organellen, einschließlich der Mitochondrien.

Als Reaktion darauf setzen die geschädigten Mitochondrien Cytochrom c frei, das an den apoptotischen Protease-aktivierenden Faktor-1 bindet und die Apoptosomenbildung und die Umwandlung von Pro-Caspase-9 in aktive Caspase-9 auslöst.

Caspase 9 aktiviert Henker-Caspasen, spaltet zelluläre Proteine weiter und führt zum apoptotischen neuronalen Tod.

Ersetzen Sie das Medium durch frische, wasserstoffperoxidfreie Medien, um die Signalkaskade zu stoppen.

Bei ROS-induziertem Zelltod behandeln Sie die Neuronen fünf Minuten lang mit Wasserstoffperoxid bei 75 bis 100 Mikromolaren. Schalten Sie es nach fünf Minuten auf die konditionierten Medien aus Parallelkulturen um.

Aufgrund der Instabilität von Wasserstoffperoxid muss die Konzentration auf ein Niveau optimiert werden, das nach 24 Stunden einen Zelltod zwischen 50 % und 70 % induziert. Diese Konzentration liegt in der Regel zwischen 75 und 100 Mikromolaren.