Erzeugung dopaminerger neuronaler Organoide aus humanen embryonalen Stammzellen

Nehmen Sie humane embryonale Stammzellen oder hES-Zellen in einem mit extrazellulärer Matrix beschichteten Kolben.

Ersetzen Sie das Medium durch ein neuronales Induktionsmedium und inkubieren Sie, wobei die hES-Zellen in Kolonien von neuralen Vorläuferzellen oder NPCs differenziert werden.

Fügen Sie eine enzymatische Lösung hinzu, um die Kolonien zu dissoziieren.

Zentrifugieren, den Überstand entfernen und die Zellen in einem Induktionsmedium mit Wachstumsfaktoren resuspendieren, um die NPC-Differenzierung zu unterstützen.

Geben Sie die Zellsuspension auf inverse pyramidenförmige Mikrovertiefungen, um dreidimensionale Neurosphären zu bilden.

Übertragen Sie Neurosphären auf eine mit extrazellulärer Matrix beschichtete Platte, die ein Differenzierungsmedium mit Wachstumsfaktoren und kleinen Molekülen enthält. Inkubieren Sie unter Unruhe, um die Differenzierung in dopaminerge Vorläuferneuronen zu fördern.

Ersetzen Sie das Medium durch ein neuronales Reifungsmedium und platzieren Sie die Neurosphären auf einer Membranscheibe in einem Kultur-Well-Einsatz, um die Diffusion von Luft und Nährstoffen zu ermöglichen.

Inkubieren Sie unter statischen Bedingungen, um dreidimensionale Organoide