Direkte stereotaktische Infusion von Amyloid-Beta-Proteinen im Gehirn für ein Alzheimer-Modell

Beginnen Sie mit einer betäubten Maus mit einem freiliegenden Schädel. Die Maus ist in einem stereotaktischen Rahmen gesichert, der eine Spritze enthält, die mit aggregationsanfälligen Amyloid-beta-Proteinen vorgefüllt ist.

Markieren Sie das Bregma, einen wichtigen Referenzpunkt für die Bestimmung der Proteininfusionskoordinaten

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Bewegen Sie die Spritze und berühren Sie das Bregma und dann das Lambda, um die dorsal-ventralen Koordinaten zu bestimmen und eine präzise Nadeltiefe zu gewährleisten.

Positionieren Sie die Spritze oberhalb der vorgegebenen medial-lateralen Koordinate und zielen Sie auf den Gyrus dentatus ab, der für die Gedächtnisverarbeitung entscheidend ist.

Berühren Sie die Schädeloberfläche, stellen Sie sicher, dass die dorsal-ventrale Koordinate innerhalb der Begrenzung liegt, und markieren Sie sie. Wiederholen Sie diesen Vorgang auf der gegenüberliegenden Seite.

Bohren Sie an der markierten medial-lateralen Koordinate, injizieren Sie die Amyloid-Beta-Proteine in den Gyrus dentatus und halten Sie sie fest, um einen Rückfluss zu verhindern.

Bohren und injizieren Sie Amyloid-Beta-Proteine auf der gegenüberliegenden Seite, um eine gleichmäßige Proteindispersion zu erzielen.

Lösen Sie die Ohrstangen von der Maus und nähen Sie dann den Schnitt.

Im Laufe der Zeit aggregieren Amyloid-Beta-Proteine zu Plaques, die die Neuronen des Gyrus zählen und die Gedächtnisverarbeitung stören, was zur Alzheimer-Krankheit führt.

Machen Sie mit einem Skalpell einen 2 bis 3 Millimeter großen Schnitt in der Mittellinie der Kopfhaut. Verlängern Sie die Schnittlinie mit einer geraden feinen Schere auf etwa 1,0 Zentimeter, um die sagittale Naht, das Bregma und das Lambda des Schädels freizulegen. Ziehe danach die Haut mit einer Pinzette auseinander.

Reinige den Schädel mit einem sterilen Wattestäbchen, das mit steriler Kochsalzlösung getränkt ist. Verwenden Sie dann ein sauberes, trockenes Wattestäbchen, um den Schädel zu trocknen. Markieren Sie als Nächstes einen Punkt auf dem Bregma. Positionieren Sie die Hamilton-Spritze mit dem Mikromanipulator so, dass die Spitze der Nadel gerade den Punkt auf dem Bregma berührt. Nehmen Sie dann die DV-Koordinate auf.

Markieren Sie einen Punkt auf dem Lambda-Punkt. Stellen Sie sicher, dass die AP-Achse des Schädels waagerecht ist, indem Sie die Spritze nach hinten zum Lambdapunkt bewegen. Die Spitze der Nadel sollte den Lambda-Punkt berühren, wie sie es mit dem Bregma-Punkt getan hat. Nehmen Sie danach die DV-Position auf. Die DV-Koordinaten für Bregma und Lambda sollten innerhalb von 0,5 Millimetern liegen.

Lege nun die Nadelspitze wieder auf den Bregma-Punkt. Notieren Sie sich die Position des Start-Access Points Berechnen Sie dann die AP-Endposition, indem Sie 2 Millimeter von der Start-AP-Koordinate subtrahieren, und positionieren Sie die Spritzennadel auf die endgültige AP-Koordinate neu.

Notieren Sie sich als Nächstes die aktuelle ML-Koordinate. Berechnen Sie die linken und rechten ML-Endkoordinaten, indem Sie 1,3 Millimeter von der ML-Startkoordinate addieren oder subtrahieren, und bewegen Sie die Spritzennadel zu den ML-Endkoordinaten. Berühren Sie die Nadelspitze mit der Oberfläche des Schädels an beiden ML-Endkoordinaten, und stellen Sie sicher, dass die DV-Koordinaten innerhalb von 0,5 Millimetern liegen.

Während Sie an der abschließenden ML-Koordinate sind, ziehen Sie die Nadel 0,5 bis 1 Zentimeter über den Schädel nach oben. Markiere einen Punkt auf dem Schädel mit einem dunklen, extra feinen Marker. Wiederholen Sie diesen Schritt für die kontralaterale Seite des Schädels. Bewegen Sie dann die Spritze weg.

Bohren Sie mit einem 0,8-Millimeter-Bohrer ein Loch entweder in die linke oder rechte ML-Koordinate des Schädels. Wiederholen Sie diesen Schritt für die kontralaterale Seite. Bewegen Sie anschließend die Spritze in eines der neu eingeführten Löcher. Senken Sie die Nadel bis knapp hinter den Schädel und achten Sie darauf, das Gehirn nicht zu durchstechen.

Um sicherzustellen, dass die Nadel den Schädel passiert hat, drücke die Nadel vorsichtig gegen den Schädel, um sicherzustellen, dass die Nadel nicht aus dem Loch herauskommt. Notieren Sie als Nächstes die Start-DV-Koordinate. Berechnen Sie die End-DV-Koordinate, indem Sie 2,2 Millimeter von der Start-DV-Koordinate subtrahieren, und senken Sie die Nadel auf die End-DV-Koordinate ab.

Stellen Sie dann die stereotaktische Injektorpumpe so ein, dass 4 Mikroliter Aβ_1-42 mit einer Geschwindigkeit von 0,5 Mikrolitern pro Minute in den Gyrus dentatus infundiert werden. Lassen Sie die Nadel nach der Infusion eine weitere Minute an Ort und Stelle, um den Rückfluss der Lösung aus der Injektionsstelle zu minimieren. Bewegen Sie danach die Nadel auf die andere Seite des Gehirns und wiederholen Sie den Vorgang.

Schrauben Sie nun die Ohrbügel ab. Ziehen Sie die Kopfhaut mit einer Zange nach Standardmuster zu und verschließen Sie die Wunde mit einer Naht. Nehmen Sie den Nasenschutz ab und entfernen Sie die Maus.