Etablierung eines fokalen Demyelinisierungs-Mausmodells durch eine Zwei-Punkt-Injektion von Lysophosphatidylcholin

Beginnen Sie mit einer betäubten Maus, die in einem stereotaktischen Apparat gesichert ist und deren Kopf rasiert ist.

Desinfizieren Sie die Kopfhaut und machen Sie einen Schnitt, um den Schädel freizulegen.

Reinige den Schädel, um die Bindegewebsschicht zu entfernen.

Markieren Sie mit dem Referenzpunkt auf dem Schädel die Zielstelle und bohren Sie ein Loch.

Nehmen Sie eine Spritze mit einer Lösung von Lysophosphatidylcholin oder LPC, die auf dem stereotaktischen Apparat befestigt ist.

Bestimmen Sie die Koordinaten für zwei Injektionspunkte in der Region der weißen Substanz des Gehirns und positionieren Sie die Spritze entsprechend.

Injizieren Sie die LPC-Lösung und lassen Sie die Nadel nach der Injektion an jeder Stelle einige Zeit an Ort und Stelle.

Nähen Sie den Schnitt und lassen Sie das Tier sich erholen.

An der Injektionsstelle interagiert LPC direkt mit dem Myelin, stört dessen Struktur und verursacht seinen Abbau.

Dies führt zu einer lokalen neuronalen Dysfunktion, wodurch ein fokales Demyelinisierungsmodell etabliert wird.

Beginnen Sie damit, eine 32-Gauge-Nadel mit einer Fünf-Mikroliter-Spritze zu verbinden. Entnehmen Sie 5 Mikroliter LPC-Lösung zur Vorbereitung der Injektion. Bestätigen Sie anschließend die Narkosetiefe der Maus durch das Fehlen eines Zehenkneifreflexes, während die Atmung sanft ist. Positionieren Sie die Maus mit der Rückenseite nach oben in einem stereotaktischen Rahmen und sichern Sie den Kopf mit einem Nasenkonus und einer Zahnklemme.

Befestigen Sie die Maus mit beidseitigen Ohrbügeln an der stereotaktischen Vorrichtung. Stellen Sie sicher, dass die Ohrbügel waagerecht und der Kopf waagerecht und stabil ist. Desinfizieren Sie die Kopfhaut durch Abwischen mit Iodophor. Schneiden Sie dann mit dem Skalpell einen kleinen Schnitt von etwa 1,5 Zentimetern entlang der Mittellinie der Kopfhaut, um den Schädel freizulegen. Wischen Sie den Schädel mit einem in 1%iges Wasserstoffperoxid getauchten Wattestäbchen ab, bis das Bregma, das Lambda und die hintere Fontanelle freiliegen.

Setzen Sie die Spritze auf das stereotaktische Gerät. Stellen Sie sicher, dass die horizontale Positionierung des Tieres gewährleistet ist und lokalisieren Sie das Corpus Callosum. Sobald die Injektionsstelle bestimmt ist, notieren Sie die Koordinaten und markieren Sie sie mit einem Marker auf dem Schädel. Bohren Sie die markierte Stelle vorsichtig mit einem Schädelbohrer. Achten Sie darauf, Blutungen zu vermeiden.

Bewegen Sie die Nadel langsam auf die angegebenen Koordinaten. Um eine Corpus-Callosum-Demyelinisierung zu induzieren, injizieren Sie 2 Mikroliter LPC-Lösung an jeder Injektionsstelle mit einer Geschwindigkeit von 0,4 Mikrolitern pro Minute. Halten Sie die Nadel nach der Injektion weitere 10 Minuten an jeder Stelle. Zum Schluss vernähen Sie die Haut mit einer 4-0-Naht und warten Sie, bis das Tier innerhalb von 10 Minuten aufwacht.