Viral-vermittelte Markierung und Transplantation von medialen ganglionären Eminenzzellen für in vivo Studien
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Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 6:31 Min. • July 8th, 2025
Entnahme des medialen ganglionären Eminenzgewebes, das kortikale Interneuronen-Vorläuferzellen enthält, aus genetisch veränderten Mausembryonen.
Fügen Sie ein kationisches Polymer hinzu und dissoziieren Sie das Gewebe in eine einzellige Suspension.
Fügen Sie lentivirale Vektoren hinzu, die einen Cre-Rekombinase-abhängigen GFP-Reporter tragen, der von Lox-Stellen flankiert wird. Ausbrüten.
Das Polymer neutralisiert die Ladungen der Virus- und Wirtszellmembran und ermöglicht so die virale Fusion und RNA-Freisetzung.
Die virale RNA wird reverse-transkribiert und in das Wirtsgenom integriert.
Zentrifugieren und den Überstand verwerfen. Überschüssiges Medium aufnehmen.
Übertragen Sie die Zellen auf eine hydrophobe Oberfläche und laden Sie sie in eine Injektionsvorrichtung.
Injizieren Sie die Zellen in die Hirnrinde eines betäubten Mauswelpen.
Lassen Sie den Welpen sich erholen und wachsen.
Die transplantierten Vorläuferzellen differenzieren sich zu reifen Interneuronen in der Hirnrinde.
Eine Untergruppe dieser Interneuronen exprimiert Cre-Rekombinase und RFP.
In diesen Interneuronen schneidet Cre die Lox-Stellen heraus, schaltet das GFP-Gen um und ermöglicht seine Expression.
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