Matrixbasiertes Tumorinvasionsmodell unter Verwendung von Mikroglia-Glioblastom-Co-Kultur

0 Ansichten3:23 Min. • July 8th, 2025

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Beginnen Sie mit der Zugabe einer kalten Suspension von Glioblastom- und Mikrogliazellen, die jeweils mit einem bestimmten Fluoreszenzfarbstoff gefärbt sind, in eine kalte Polymermatrixlösung.

Der kalte Zustand verhindert die vorzeitige Polymerisation der Matrix.

Übertragen Sie dann die Mischung in einen porösen Kammereinsatz innerhalb einer Kulturplatte.

Inkubieren, um eine Matrixpolymerisation zu ermöglichen, und ein Gel bilden, das die Zellen einbettet.

Geben Sie serumfreies Medium in die Einlage und serumhaltiges Wachstumsmedium in die Vertiefung darunter, dann inkubieren.

Die chemischen Faktoren im Serum fördern die Zellmigration in Richtung des serumreichen Mediums.

Darüber hinaus sezernieren Mikroglia Signalmoleküle, die mit Glioblastomzellen interagieren.

Dies verstärkt die Migration der Glioblastomzellen zur Unterseite des porösen Ansatzes, ähnlich wie bei der Wanderung von einem Tumor in das umliegende Gewebe.

Entfernen Sie die Zellen von der Oberseite der Kammer.

Fixieren Sie nun die restlichen Zellen mit einem Fixiermittel und waschen Sie sie mit Puffer ab. Die ausgeprägte Fluoreszenz der Zellen hilft, die Zellmigration zu verfolgen.

Tauen Sie den Matrix-Mix über Nacht bei vier Grad Celsius auf. Bereiten Sie anschließend eine Konzentration von 10 mg/ml Matrix in den entsprechenden Medien auf Eis vor. Ernten Sie dann die markierten Zellen für die Suspension in der Matrix, wie zuvor gezeigt. Pipettieren Sie dann 1,5 mal 10 bis die fünften GL261-Zellen in einem Volumen von 150 Mikrolitern plus fünfmal 10 bis die vierten Mikrogliazellen in 50 Mikrolitern in ein 1,5-Milliliter-Mikrofuge-Röhrchen.

Geben Sie 2 mal 10 zu den fünften GL261-Zellen in einem Volumen von 200 Mikrolitern in ein separates 1,5-Milliliter-Mikrofuge-Röhrchen. Schleudern Sie die Zellen fünf Minuten lang in einer Mikrofuge bei 120 g G. Dann resuspendieren Sie die Zellen in 200 Mikrolitern kalter Matrix auf Eis.

Für diesen Schritt ist es entscheidend, eine Eisschale in der Haube bereit zu haben. Bewahren Sie die Tuben auf Eisspitzen im Kühlschrank auf. Stellen Sie sicher, dass alles gekühlt ist, um eine vorzeitige Polymerisation des reifen Gels zu verhindern.

Nach der Resuspension werden 50.000 Zellen mit einem Volumen von 50 Mikrolitern auf die Mitte des oberen Fachs eines Kammereinsatzes mit einer Porengröße von 8 Mikrometern aufgebracht. Inkubieren Sie es dann 30 Minuten lang bei 37 Grad Celsius, damit die Polymerisation stattfinden kann. Geben Sie nach 30 Minuten 200 Mikroliter serumfreies Medium in die obere Kammer und 700 Mikroliter Serum mit Zellwachstumsmedium in die untere Vertiefung

.

Nach 48-stündiger Inkubation werden die Zellen durch sanftes Ansaugen aus dem oberen Teil der Kammer entfernt. Fixieren Sie die Kammern wie zuvor und ersetzen Sie das Fixiermittel durch 500 Mikroliter 1X PBS, bevor Sie die Zellen abbilden.

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Live Cell Imaging-Assays Studie Glioblastom Gehirn Tumor Stammzellen Migration und Invasion

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Zuletzt aktualisiert: 22 August 2026