Messung der Dopaminaufnahme in Synaptosomen des Gehirns von Mäusen mit radioaktiv markiertem Dopamin

Gewinnen Sie Synaptosomen, membrangebundene Strukturen, die von den intakten präsynaptischen Enden neuronaler Synapsen stammen, die Dopamintransporter (DAT) enthalten, aus einem Mäusegehirn.

Füllen Sie die Reagenzgläser mit Puffern, die Liganden enthalten, und die Referenzröhrchen mit Puffer, die Liganden und einen DAT-Inhibitor enthalten.

Fügen Sie die Synaptosomen hinzu.

Die Liganden hemmen Dopamin-abbauende Enzyme und andere Transporter und verhindern so den Dopaminabbau und die unspezifische Aufnahme.

Führen Sie unmarkiertes und radioaktiv markiertes Dopamin ein.

Im Testzustand nimmt die synaptosomale DAT das Dopamin auf.

In der Referenzbedingung verhindert der Inhibitor die DAT-vermittelte Dopaminaufnahme und lässt nur eine Hintergrundaufnahme zu.

Geben Sie die Proben in Mikrofaserfilter, die die Synaptosomen zurückhalten.

Waschen, um ungebundenes Dopamin zu entfernen.

Übertragen Sie die Filter in Szintillationsröhrchen.

Szintillationsflüssigkeit hinzufügen, die eine strahlenempfindliche Verbindung enthält.

Legen Sie die Röhrchen in einen Szintillationszähler.

Radioaktive Emissionen von Dopamin regen die Verbindung dazu an, Licht zu emittieren, was mit dem Zähler gemessen wird