Markierung von Biocytin-gefüllten Interneuronen in Hippocampusschnitten von Ratten zur Visualisierung

Nehmen Sie fixierte und permeabilisierte Hippocampus-Schnitte von Ratten, die Biocytin-gefüllte Interneurone mit inaktivierten endogenen Peroxidasen enthalten.

Fügen Sie Avidin-Biotin-Komplexe (ABC) hinzu, die Meerrettichperoxidase (HRP) enthalten, und inkubieren Sie, damit das Avidin an Biocytin binden kann.

Ungebundenes ABC abwaschen.

Fügen Sie eine Mischung aus chromogenem Substrat und Metallverstärker hinzu und inkubieren Sie.

Führen Sie Wasserstoffperoxid ein, um das HRP zu aktivieren, das das Substrat oxidiert und einen dunklen Niederschlag bildet, während der Enhancer den Kontrast verbessert.

Übertragen Sie die Scheiben auf Filterpapier und entfernen Sie überschüssigen Puffer. Mit Osmiumtetroxid behandeln, um den Kontrast zu verstärken.

Legen Sie die Scheiben auf eine Folie und montieren Sie sie. Entwässern Sie sie mit steigenden Ethanolkonzentrationen.

Die Scheiben in absolutem Ethanol und Propylenoxid waschen.

Füge Harz hinzu, um das Gewebe zu infiltrieren.

Legen Sie die Scheiben in eine Planchette und erhitzen Sie sie, um das Harz zu polymerisieren. Übertragen Sie die Scheiben auf einen Objektträger, platzieren Sie ein Deckglas und verfestigen Sie das Harz.

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