In-situ-Hybridisierung mit Oligonukleotidsonden zur Untersuchung der RNA-Expression in Hirnschnitten von Ratten

Nehmen Sie fixierte Hirnschnitte von einer Ratte mit Serotonin-Syndrom, was zu einer veränderten Serotoninrezeptor-RNA-Synthese in den Neuronen führt.

Dehydrieren Sie das Gewebe mit Alkohol. Tragen Sie eine Vorbehandlungslösung auf, um endogene hydrolysierende Enzyme zu deaktivieren und deren Wechselwirkung mit Nachweisreagenzien zu verhindern.

Mit einem Siedepuffer behandeln, um die fixierungsinduzierten Vernetzungen aufzubrechen und die Ziel-RNAs freizulegen.

Dehydrieren Sie das Gewebe, ziehen Sie eine hydrophobe Barriere und inkubieren Sie sie mit einer Lösung, um die Zellmembranen zu permeabilisieren.

Fügen Sie Oligonukleotidsonden hinzu und inkubieren Sie, so dass die Sonden mit den Ziel-RNAs hybridisieren können.

Waschen Sie, um ungebundene Sonden zu entfernen, und inkubieren Sie dann mit Amplifikationsreagenzien, die Vorverstärker-, Verstärker- und enzymkonjugierte Markierungssonden enthalten, die an die Oligonukleotidsonden binden.

Inkubieren Sie mit chromogenen Substraten, die durch die enzymkonjugierten Sonden hydrolysiert werden, wodurch sichtbare Farbe entsteht.

Behandeln Sie mit Xylol, um die Transparenz des Gewebes zu erhöhen, fügen Sie ein Eindeckmedium hinzu und tra