Ein in vitro Modell zur Untersuchung der Überquerung der Blut-Hirn-Schranke durch Krankheitserreger und der Infektion von Gehirnzellen

Nehmen wir ein In-vitro-Modell der Blut-Hirn-Schranke (BHS), das aus zwei Kompartimenten besteht, die durch eine poröse Membran getrennt sind.

Das obere oder luminale Kompartiment enthält mikrovaskuläre Endothelzellen. Diese Zellen exprimieren Tight Junctions, die das Endothel der Blut-Hirn-Schranke nachahmen, das den Durchgang von Zellen und Molekülen einschränkt.

Das untere oder abluminale Kompartiment enthält Neuronen, Astrozyten und Mikroglia, die das Hirnparenchym darstellen.

Führen Sie ein neurotropes Virus in das luminale Kompartiment ein, um eine durch Blut übertragene Infektion zu simulieren und zu inkubieren.

Das Virus wird von den Endothelzellen endozytiert, durchläuft einen intrazellulären Transport innerhalb der Vesikel und wird auf der abluminalen Seite freigesetzt.

Entfernen Sie nach der Inkubation die obere Kammer. Nehmen Sie eine Probenahme des Mediums von der abluminalen Seite, um die Virusmenge zu beurteilen und die erfolgreiche Überquerung der Endothelschicht zu bestätigen.

Frisches Medium hinzufügen und erneut inkubieren.

Das Virus dringt über die Endozytose in die Nervenzellen ein, repliziert sich und setzt virale Nachkommen frei.

Quantifizieren Sie die erhöhte extrazelluläre Viruslast, um die virale Neuroinvasion und Replikation zu bestätigen.

Nach der Einrichtung eines BBB-Mini-Gehirngeräts, wie gezeigt, fügen Sie 3.500 plaquebildende Einheiten des französischen neurotropen Virusstamms des Gelbfiebervirus, verdünnt in 50 Mikrolitern 2% FBS-Endothelzellmedium, sehr vorsichtig auf das luminale Kompartiment hinzu. Beimpfen Sie das Kontroll-BBB-Mini-Gehirn mit 50 Mikrolitern 2% FBS-Endothelzellmedium ohne Virus. Legen Sie dann das virusexponierte BBB-Mini-Gehirngerät für 24 Stunden in den Inkubator.

Entfernen Sie am nächsten Tag die Einsätze, um die Permeabilität der Endothelzellen in einer Begleitvertiefung zu bestimmen, wie gerade gezeigt, und bewahren Sie 1 Milliliter Probe aus jeder Vertiefung auf, um den Virustiter im abluminalen Kompartiment zu bestimmen.

Vorsichtig unter dem Einsatz, um ein Austreten des Luminalfachs in das Abluminalfach zu vermeiden.