Immunfluoreszenzfärbung von Drosophila-Gehirnen für die Einzelzellbildgebung von Gliazellen

Beginnen wir mit Gehirnen von transgenen Drosophila-Fliegen, die verschiedene Gliazelltypen enthalten, die ein zellspezifisches Rekombinasesystem beherbergen.

Es steuert die Expression eines Zelloberflächenproteins, das mit verschiedenen antigenen Epitopen auf demselben Zelltyp fusioniert ist.

Behandeln Sie das Gewebe mit einem Fixiermittel, um Proteine zu vernetzen und die Gewebearchitektur zu erhalten.

Waschen, um überschüssiges Fixiermittel zu entfernen.

Fügen Sie blockierende Proteine hinzu, um unspezifische Bindungsstellen zu maskieren und die Hintergrundfärbung zu reduzieren.

Inkubieren Sie das Gewebe mit einem primären Antikörpercocktail, der an die verschiedenen Epitope bindet, die auf Gliazellen exprimiert werden.

Waschen, um ungebundene Primärantikörper zu entfernen.

Inkubieren Sie mit Fluorophor-konjugierten Sekundärantikörpern, die an die Primärantikörper binden.

Waschen, um ungebundene Sekundärantikörper zu entfernen.

Montieren Sie das Gehirn in einem bildgebenden Abstandshalter und legen Sie ein Deckglas an. Der Abstandshalter schafft eine Kammer für das Gewebe, wobei seine dreidimensionale Struktur erhalten bleibt.

Verschiedene Zellen des gleichen Gliatyps, die mit u