JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 4:11 Min. • July 8th, 2025
Die Kontrolllarven und die mutierte Drosophila-Larve werden in getrennte Schalen gegeben, die einen glukosefreien Puffer enthalten.
Präparieren Sie die Larven, um innere Organe zu entfernen und das Zentralnervensystem oder ZNS freizulegen.
Das ZNS umfasst einen ventralen Nervenstrang, in dem sich Motoneuronen befinden. In den mutierten Larven zeigen diese Neuronen einen hochregulierten Glukosestoffwechsel
.Motoneuronen in beiden Gruppen exprimieren intrazelluläre Glukosesensoren, die Donor- und Akzeptorfluorophore enthalten.
Positionieren Sie die Larven unter einem konfokalen Mikroskop. Bei der Anregung emittiert das Donorfluorophor Fluoreszenz.
Lokalisieren Sie die Motoneuronen anhand dieser Fluoreszenz.
Ersetzen Sie den Puffer durch eine mit Glukose angereicherte Lösung.
Glukose dringt in die Neuronen ein, bindet an die Sensoren und löst eine Konformationsänderung aus, die die beiden Fluorophore in die Nähe bringt.
Bei der Anregung absorbiert der Akzeptor die vom Donor emittierte Energie, die als Fluoreszenz-Resonanz-Energietransfer oder FRET bezeichnet wird, und emittiert Fluoreszenz.
Das FRET-Signal korreliert mit der Glukoseaufnahme. Eine höhere Intensität des Akzeptorsignals
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