Nachweis von neurodegenerativem Protein α-Synuclein mittels ELISA

Beginnen Sie mit dem Hirngewebe einer transgenen Maus, die mutiertes α-Synuclein überexprimiert, ein fehlgefaltetes neuronales Protein, das mit neurodegenerativen Erkrankungen in Verbindung gebracht wird, und in einen Puffer mit hohem Salzgehalt eingetaucht ist.

Homogenisieren Sie das Gewebe mit einem großen Stößel, gefolgt von einem kleinen Stößel, um das Gewebe aufzubrechen und intrazelluläre Proteine, einschließlich α-Synuclein, freizusetzen.

Das Homogenat in ein Röhrchen geben und zentrifugieren. Sammeln Sie den proteinhaltigen Überstand und verdünnen Sie ihn mit einem Puffer.

Geben Sie diesen Überstand in eine mit α-Synuclein-spezifischen Antikörpern beschichtete Mikroplatte, die mit einem Blockierungsmittel vorbehandelt wurde, um eine unspezifische Bindung zu verhindern.

Unter Rühren inkubieren, so dass normales und mutiertes α-Synuclein binden können.

Waschen Sie die Platte, fügen Sie dann Nachweisantikörper hinzu, die spezifisch für mutiertes α-Synuclein sind, und inkubieren Sie unter Rühren.

Erneut waschen und enzymgebundene Antikörper hinzufügen, gefolgt von einer Inkubation unter Rühren.

Substrat zugeben und im Dunkeln unter Rühren inkubieren. Das Substrat reagiert mit dem Enzy