Immunmarkierung von neuronalen Membranproteinen in einer gefriergebrochenen Probe von Hirngewebe der Maus

Nehmen Sie eine gefriergebrochene Probe von Mäusehirngewebe in einem Puffer.

Die Probe ist mit Platin beschichtet, um die Oberflächendetails zu verbessern, und mit Kohlenstoff für die strukturelle Stabilität.

Übertragen Sie die Probe in ein Fläschchen mit einem Aufschlusspuffer, der Detergens enthält.

Inkubieren, um den Gewebeabbau zu erleichtern, wobei die Membran und die in die Beschichtung eingebetteten Proteine intakt bleiben.

Mit Puffer waschen, um Schmutz zu entfernen.

Fügen Sie eine Blockierungslösung hinzu, um eine unspezifische Antikörperbindung zu verhindern.

Führt primäre Antikörper ein, die spezifisch für das Ziel-neuronale Membranprotein sind.

Mit Puffer waschen, um ungebundene Antikörper zu entfernen.

Inkubieren Sie mit goldkonjugierten Sekundärantikörpern, die an Primärantikörper binden.

Mit Puffer waschen, um überschüssige Antikörper zu entfernen.

Spülen Sie mit Wasser, um Artefakte durch Salzrückstände während der Mikroskopie zu vermeiden.

Montieren Sie die Probe auf ein Transmissionselektronenmikroskop oder TEM-Gitter.

Visualisieren Sie unter dem TEM das Ziel-neuronale Membranprotein, das durch Goldpartikel identifiziert wird, die als schwarze Punkte erscheinen.

Für den SDS